申请/专利权人：深圳康美生物科技股份有限公司

申请日：2022-10-21

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN116287434B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93;C12R1/35;C12R1/01;C12R1/46;C12R1/22;C12R1/445;C12R1/385;C12R1/44

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2023.07.11#实质审查的生效;2023.06.23#公开

摘要：本发明属于生物检测领域，具体涉及吸道症候群病原体核酸检测试剂盒。本发明的检测试剂盒可以检测多达39种病原体微生物，包括7种人冠状病毒，甲型流感病毒3种亚型，乙型流感病毒2种亚型，副流感病毒3种亚型，呼吸道合胞疱疹病毒2种亚型，鼻病毒，人偏肺病毒，丙型流感病毒，肠道病毒2种，人巨细胞病毒，腺病毒，EB病毒，肺炎支原体，肺炎衣原体，沙眼衣原体，鹦鹉热衣原体，Q热立克次体，肺炎链球菌，肺炎克雷伯菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，A族链球菌，耐甲氧西林葡萄球菌，鲍曼不动杆菌，嗜肺军团菌，流感嗜血杆菌。本发明具有检测病原体数量多，病原体类型广，特异性好、便于运输和保存的特点。

主权项：1.呼吸道症候群病原体核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测39种呼吸道病原体和人源内参基因GAPDH，共计40个靶基因，采用5色荧光PCR技术，使用整条8连管，每管中包括检测5种靶基因的特异性引物和探针，8连管的组合如下：1管：冠状病毒SARS-CoV、冠状病毒HCoV-NL63、冠状病毒HCoV-HKU1、冠状病毒229E、冠状病毒HCoV-OC43；2管：冠状病毒MERS-CoV、新型冠状病毒SARS-CoV-2、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型；3管：甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H5N1、甲型流感病毒H7N9、乙型流感病毒Victoria、乙型流感病毒Yamagata；4管：呼吸道合胞疱疹病毒A型、呼吸道合胞疱疹病毒B型、鼻病毒、人偏肺病毒、丙型流感病毒；5管：肠道病毒CA16、肠道病毒EV71、人巨细胞病毒、腺病毒、EB病毒；6管：肺炎支原体、肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、Q热立克次体；7管：肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、化脓性链球菌；8管：耐甲氧西林葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、嗜肺军团菌、流感嗜血杆菌、人源内参基因GAPDH；其中，所述特异性引物为，新型冠状病毒SARS-Cov-2的引物序列：SEQIDNO.1.：5'-TTCCATGTGGGCTCTTATAATC-3'，SEQIDNO.2：5'-TCAACACACATAAAAACAATACCTC-3'；冠状病毒HCoV-229E的引物序列:SEQIDNO.3：5'-GTTTTCATCTTCATTCTCTGTTGC-3'；SEQIDNO.4：5'-TGTCACAAGAAAACAACAAAAAAT-3'；冠状病毒SARS-CoV的引物序列:SEQIDNO.5：5'-GAGTAAAATTTTGGCTTATGTCA-3'；SEQIDNO.6：5'-CAATAGTTGTAGGTAGTGAAGCTCT-3'；冠状病毒HCoV-OC43的引物序列：SEQIDNO.7：5'-CTTGTGCTGGAAGGCGT-3'；SEQIDNO.8：5'-TTCAAACACTCCACATGCAG-3'；冠状病毒MERS-CoV的引物序列：SEQIDNO.9：5'-GTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTAT-3'；SEQIDNO.10：5'-ACGACATGCAGGATATTCTTAG-3'；冠状病毒HCoV-HKU1的引物序列：SEQIDNO.11：5'-GTGGTTATCTTATAAGGTGGGTTA-3'；SEQIDNO.12：5'-TACGCATTAATATCAAACTGGTT-3'；冠状病毒HCoV-NL63的引物序列：SEQIDNO.13：5'-TTGGGTGTTCGTGTTTTAGAT-3'；SEQIDNO.14：5'-CTCAATAGAATCATCCAAAAGC-3'；甲型H1N1流感病毒的引物序列：SEQIDNO.15：5'-GCCCCCTCAAAGCCGA-3'；SEQIDNO.16：5'-CGCTCACTGGGCACGG-3'；甲型H5N1流感病毒的引物序列：SEQIDNO.17：5'-GCCCCCTCAAAGCCGA-3'；SEQIDNO.18：5'-CGCTCACTGGGCACGG-3'；甲型H7N9流感病毒的引物序列：SEQIDNO.19：5'-GCCCCCTCAAAGCCGA-3'；SEQIDNO.20：5'-CGCTCACTGGGCACGG-3'；乙型流感病毒Victoria型的引物序列：SEQIDNO.21：5'-TTGCAAATCTCAAAGGAACA-3'SEQIDNO.22：5'-TGCATTATAGGAAAGCACCC-3'乙型流感病毒Yamagata型的引物序列：SEQIDNO.23：5'-TTGCAAATCTCAAAGGAACA-3'；SEQIDNO.24：5'-TGCATTATAGGAAAGCACCC-3'；丙型流感病毒的引物序列：SEQIDNO.25：5'-GACGACTACACACCAGACATCC-3'；SEQIDNO.26：5'-AATTTTTAAAGCTGTTCTTCCAC-3'；副流感病毒1型的引物序列：SEQIDNO.27：5'-ACAATCAAAGAGACAATCACAGAA-3'；SEQIDNO.28：5'-GATCTCTGCTTTGCTTGTTTAAC-3'；副流感病毒2型的引物序列：SEQIDNO.29：5'-CTAAGTGATGGAATCAATCGC-3'；SEQIDNO.30：5'-AGGTCAGTTGTGGCATAATCTT-3'；副流感病毒3型的引物序列：SEQIDNO.31：5'-AAGTCATGTTCTCTAGCACTCCT-3'；SEQIDNO.32：5'-TTGTTGAGATTGAGCCATCATA-3'；呼吸道合胞疱疹病毒A型的引物序列：SEQIDNO.33：5'-GTYTTAACCAGCAAAGTGTTAGA-3'；SEQIDNO.34：5'-CACCTGCATTRACACTAAATTCT-3'；呼吸道合胞疱疹病毒B型的引物序列：SEQIDNO.35：5'-GTYTTAACCAGCAAAGTGTTAGA-3'；SEQIDNO.36：5'-CACCTGCATTRACACTAAATTCT-3'；鼻病毒HRV的引物序列：SEQIDNO.37：5'-TTGAGTCCTCCGGCCC-3'；SEQIDNO.38：5'-AAACACGGACACCCAAAGTA-3'；人偏肺病毒的引物序列：SEQIDNO.39：5'-YGACARTCAARATGATTATGAGTAA-3'；SEQIDNO.40：5'-GCTGCTTCATTACCCATGAA-3'；肠道病毒EV71的引物序列：SEQIDNO.41：5'-CGTTCTCAGTGCGGACTG-3'；SEQIDNO.42：5'-TAGGTAGTTCTGGTTRCGCATY-3'；肠道病毒CA16的引物序列：SEQIDNO.43：5'-GGCGGAAATGCGAGTT-3'；SEQIDNO.44：5'-GTACTGYAGYAATTGGGGGA-3'；人巨细胞病毒HCMV的引物序列：SEQIDNO.45：5'-AGAGGAGACTAGTGTGATGCTG-3'；SEQIDNO.46：5'-AATGTACTGGGCAAAGACCT-3'；腺病毒AD的引物序列：SEQIDNO.47：5'-GACATGACYTTYGAGGTGGA-3'；SEQIDNO.48：5'-GTAGACGGCCTCGATGA-3'；EB病毒的引物序列：SEQIDNO.49：5'-CTAACTCCAACGAGGGCAG-3'；SEQIDNO.50：5'-GGACCACCTCCAGGTGC-3'；肺炎支原体MP的引物序列：SEQIDNO.51:5'-ACCAATGCCATCAACCC-3'；SEQIDNO.52：5'-AGTGATGCCCTTAGCGC-3'；肺炎衣原体CP的引物序列：SEQIDNO.53：5'-TTCCCTTGCCAACAGACG-3'；SEQIDNO.54：5'-GGCTGAGCAATGCGGATGT-3'；沙眼衣原体CT的引物序列：SEQIDNO.55：5'-AATGCAAATCGTTTCCTTG-3'；SEQIDNO.56：5'-TTGTGCATTTACGTGAGCTG-3'；鹦鹉热衣原体的引物序列：SEQIDNO.57：5'-TACGGGTTCCGCTCTCTC-3'；SEQIDNO.58：5'-GCGTCACACCAAGTAGMG-3'；Q热立克次体的引物序列：SEQIDNO.59：5'-AATACGGACTCACGATGGC-3'；SEQIDNO.60：5'-AACACCCGTTTCATCCG-3'；肺炎链球菌SA的引物序列：SEQIDNO.61：5'-ATTGTTGGGAACGGTTGC-3'；SEQIDNO.62：5'-TTTCAATCAGTTCAACCGCT-3'；肺炎克雷伯菌KPN的引物序列：SEQIDNO.63：5'-GACACGGTCCAGACTCCTAC-3'；SEQIDNO.64：5'-AAGTGCTTTACAACCCGAA-3'；金黄色葡萄球菌的引物序列：SEQIDNO.65：5'-GAGTTAGATAAATATTTACAGCAACA-3'；SEQIDNO.66：5'-GGCACGATATCTTTATCATATAGA-3'；铜绿假单胞菌PA的引物序列：SEQIDNO.67：5'-GACCGCTACCGAAGACG-3'；SEQIDNO.68：5'-CGCTCGTTAGCCTCGTC-3'；化脓性链球菌的引物序列：SEQIDNO.69：5'-ACCTACTTATAGCGGAAGAGAAT-3'；SEQIDNO.70：5'-ACGAGAGCTACCTGCAGAAC-3'；耐甲氧西林葡萄球菌的引物序列：SEQIDNO.71：5'-AGTTAGATTGGGATCATAGCGT-3'；SEQIDNO.72：5'-TTCCACATTGTTTCGGTCTAA-3'；鲍曼不动杆菌的引物序列：SEQIDNO.73：5'-ACACACTACGGGTGTTTTAGTT-3'；SEQIDNO.74：5'-AGCATTAAGCATTTTGAAGGT-3'；嗜肺军团菌LP的引物序列：SEQIDNO.75:5'-ACATCATTAGCTACAGACAAGGA-3'；SEQIDNO.76：5'-TCGGTTAAAGCCAATTGAG-3'；流感嗜血杆菌Hi的引物序列：SEQIDNO.77:5'-GTCGTTTGTATGATGTTGATCC-3'；SEQIDNO.78：5'-CGGGCTTTCATCCCTG-3';人源内参基因GAPDH基因的引物序列：SEQIDNO.118：5'-ATGGACACGCTCCCCTGAC-3'；SEQIDNO.119：5'-TGAGTCCTTCCACGATACCAAA-3';探针序列为：新型冠状病毒SARS-Cov-2的探针序列：SEQIDNO.79：5'-TGTTACTTCTAACTACTCAGGTG-3'；冠状病毒HCoV-229E的探针序列：SEQIDNO.80：5'-CTTAATTGTGCATTAGGTGC-3'；冠状病毒SARS-CoV的探针序列：SEQIDNO.81：5'-ATTCTTAGGACAAGCAGC-3'；冠状病毒HCoV-OC43的探针序列：SEQIDNO.82：5'-AAGGAACAGCCTACAGTAA-3'；冠状病毒MERS-CoV的探针序列：SEQIDNO.83：5'-TTCTGGCTAAAGGGC-3'；冠状病毒HCoV-HKU1的探针序列：SEQIDNO.84：5'-CCACTATTCCTAAAGC-3'；冠状病毒HCoV-NL63的探针序列：SEQIDNO.85：5'-TCTGATAATAATTGTTGGATT-3'；甲型H1N1流感病毒的探针序列：SEQIDNO.86：5'-TCTCATGGAATGGCTAAAGACAA-3'；甲型H5N1流感病毒的探针序列：SEQIDNO.87：5'-TCTCATGGAGTGGCTAAAGACAA-3'；甲型H7N9流感病毒的探针序列：SEQIDNO.88：5'-CATGGAGTGGATAAAGACAAGACC-3'；乙型流感病毒Victoria型的探针序列：SEQIDNO.89：5'-CTTGCCGAGGGTATTTTCC-3'；乙型流感病毒Yamagata型的探针序列：SEQIDNO.90：5'-TTAGCAGAAGGTGTGGTCCC-3'；丙型流感病毒的探针序列：SEQIDNO.91：5'-CAAGAAAAGTGAAAGATACAGGAG-3'；副流感病毒1型的探针序列：SEQIDNO.92：5'-AGAAGTGATATCAAGGAC-3'；副流感病毒2型的探针序列：SEQIDNO.93：5'-TGCTATACCAGGAGGTTGTGTC-3';副流感病毒3型的探针序列：SEQIDNO.94：5'-TCAAGTACAATATCTTCTA-3'；呼吸道合胞疱疹病毒A型的探针序列：SEQIDNO.95：5'-AGATAAACAGTTGTTACCTA-3'；呼吸道合胞疱疹病毒B型的探针序列：SEQIDNO.96：5'-TTCCAACAATCTGCTGTT-3';鼻病毒HRV的探针序列：SEQIDNO.97：5'-GGCTAACCYTAACCCT-3';人偏肺病毒的探针序列：SEQIDNO.98：5'-TGGGACAAGTCAAAAT-3';肠道病毒EV71的探针序列：SEQIDNO.99：5'-TCCAAGTCCAAGTACCCTTTAG-3'；肠道病毒CA16的探针序列：SEQIDNO.100：5'-ATGCGCTTTGATGC-3'；人巨细胞病毒HCMV的探针序列：SEQIDNO.101：5'-ATAACCAAGCCTGAGG-3'；腺病毒AD的探针序列：SEQIDNO.102：5'-CCCATGGATGAGCCCAC-3'；EB病毒的探针序列：SEQIDNO.103：5'-TTGAGAGCAGAGTGGG-3'；肺炎支原体MP的探针序列：SEQIDNO.104：5'-TTAACCCCGTGAACG-3'；肺炎衣原体CP的探针序列：SEQIDNO.105：5'-CGACCATCAATTATC-3'；沙眼衣原体CT的探针序列：SEQIDNO.106：5'-AAATCTAGAAAATCTTGCG-3'；鹦鹉热衣原体的探针序列：SEQIDNO.107：5'-CAAGCCTTGCCTGTAG-3'；Q热立克次体的探针序列：SEQIDNO.108：5'-CCAAGCGATTTTATGA-3'；肺炎链球菌SA的探针序列：SEQIDNO.109：5'-TAGGACCTGTTGATAATG-3'；肺炎克雷伯菌KPN的探针序列：SEQIDNO.110：5'-AGCAGTGGGGAATAT-3'；金黄色葡萄球菌的探针序列：SEQIDNO.111：5'AATTAGATCCGTATTGGTTA-3'；铜绿假单胞菌PA的探针序列：SEQIDNO.112：5'-GCTCGTGCTCAGGCTCG-3'；化脓性链球菌的探针序列：SEQIDNO.113：5'-ATTTCAGAATTGATGGCT-3'；耐甲氧西林葡萄球菌的探针序列：SEQIDNO.114：5'-AATGCAGAAAGACCAAA-3'；鲍曼不动杆菌的探针序列：SEQIDNO.115：5'-AACTCAACAAAGCTATG-3'；嗜肺军团菌LP的探针序列：SEQIDNO.116：5'-ATAGCATTGGTGCCGATTT-3'；流感嗜血杆菌Hi的探针序列：SEQIDNO.117：5'-ACTCGTTTTACAAAAGA-3';人源内参基因GAPDH基因的探针序列：SEQIDNO.120：5'-GCAATGCCTCCTGCACCACCAA-3'；所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团;所述荧光基团为FAM、HEX、JOE、TET、CY3、CY5、ROX或Texas;所述淬灭基团为TAMRA、BHQ或MGB。

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