申请/专利权人：南京高新工大生物技术研究院有限公司;南京工业大学

申请日：2023-03-21

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN116064487B

主分类号：C12N9/42

分类号：C12N9/42;C12N11/093;C12N1/14;C12M1/04;C12M1/02;C12M1/00;C12R1/885

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2023.05.23#实质审查的生效;2023.05.05#公开

摘要：本发明公开了一种固定化里氏木霉高产纤维素酶的方法。通过采用一定密度、孔径和外观直径的聚氨酯泡沫作为里氏木霉吸附的固定化载体，利于系统传质作用，可减少工业放大生产过程中的能耗。将利用改性剂聚醚酰亚胺改性后的固定化载体置于生物反应器的固定化载体区域使其自由悬浮更好的吸附里氏木霉，再通过调节发酵培养中的碳氮源和发酵方式，调控菌体的生长，减少菌体量过多对传质带来的影响，同时也促进了酶活的提升，有利于实现长期稳定的固定化连续发酵纤维素酶。

主权项：1.一种固定化里氏木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于，将里氏木霉种子液接种于装有固定化载体的生物反应器中连续发酵产纤维素酶；其中，所述的固定化载体是使用改性剂改性后的聚氨酯泡沫，具体是将聚氨酯泡沫置于30-100℃0.1-1%的改性剂水溶液中浸泡1-6小时后用水冲洗，再60-100℃烘干得到；所述的改性剂为聚醚酰亚胺；其中，所述的固定化载体，其载体直径为8-24mm，载体孔径为1-4mm，直径与孔径比值为4-8，载体密度为0.83-0.91gcm3；其中，所述的固定化载体在连续发酵过程中，其载体量为4-5gL；其中，所述的连续发酵，其初始发酵培养基体积为生物反应器体积的45-65%，当发酵还原糖降低至1-3gL时流加诱导物，控制残糖水平在2-4gL，连续发酵5-7天后，进行换液处理，排出发酵醪，补充新鲜的发酵培养基，重复3-6批次；其中，所述的初始发酵培养基的组成如下：乳糖10-20gL，葡萄糖0-10gL，玉米浆10-35gL，硫酸铵2-8gL，硫酸镁0.1-0.8gL，硫酸亚铁0.01-0.1gL，硫酸锰0.001-0.05gL，氯化钙0.1-1gL，磷酸二氢钾0.1-1gL，VB100-0.01gL，pH3.8-5.0；其中，所述的连续发酵，其条件为：通气比0.2-1vvm，转速250-550rmin，压力0.05-0.1Mpa，溶氧量10-35%；其中，所述的诱导物为乳糖和槐糖混合液，其中，溶剂为水，乳糖与槐糖的质量比为1-4:6-9，乳糖和槐糖的总质量与水的质量体积比为10-50g：100mL；所述的诱导物流加速度为50升罐50-180mLH；其中，所述的新鲜的发酵培养基，其组分如下：乳糖10gL，玉米浆10gL，硫酸铵4gL，硫酸镁0.6gL，硫酸亚铁0.06gL，硫酸锰0.01gL，氯化钙0.2gL，磷酸二氢钾0.6gL，pH3.9。

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