申请/专利权人：王玮

申请日：2022-05-12

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN114806902B

主分类号：C12N1/15

分类号：C12N1/15;C12N15/80;C12N15/67;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/53;C12P7/46;C12R1/885

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：本发明公开了一种获取非转基因的里氏木霉定向基因工程改良株的方法和应用，属于生物工程技术领域。本发明首次鉴定出里氏木霉内源的四碳二元羧酸转运蛋白、丙酮酸羧化酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、葡萄糖转运蛋白四种功能的基因；并首次通过改造上述四种内源基因的表达强度，构建出大量生产L‑苹果酸的基因工程改良株。利用所述改良株发酵生产L‑苹果酸，其最高产量可超过90gL。所述改良株为非转基因物种，不含有任何异源基因和筛选标记，其生产的L‑苹果酸为非转基因食品，可应用于非转基因食品行业。本发明公开的改良株的获取方法，为微生物发酵生产L‑苹果酸提供了新的方法，也为转基因安全和无标记基因编辑提供了很好的研究思路。

主权项：1.一种非转基因的里氏木霉定向基因工程改良株，其特征在于，以丝状真菌里氏木霉菌为出发菌株，在不引入任何外源基因的前提下，对所述出发菌株的基因组定向分子改良，使所得的里氏木霉改良株能够生产L-苹果酸；同时，改良株属于非转基因物种，其生产的L-苹果酸属于非转基因食品；对所述出发菌株的基因组定向分子改良，包括：通过同源比对鉴定出发菌株内源的四碳二元羧酸转运蛋白、丙酮酸羧化酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、葡萄糖转运蛋白的编码基因；过表达所鉴定的出发菌株内源的四碳二元羧酸转运蛋白和丙酮酸羧化酶，以及苹果酸脱氢酶、苹果酸酶和葡萄糖转运蛋白的编码基因中的至少一种；里氏木霉菌内源的四碳二元羧酸转运蛋白的编码基因为如SEQIDNO：4、SEQIDNO：7、SEQIDNO：10和SEQIDNO：13所示序列的基因；里氏木霉菌内源的丙酮酸羧化酶的编码基因为如SEQIDNO：17所示序列的基因；里氏木霉菌内源的苹果酸脱氢酶的编码基因为如SEQIDNO：20和SEQIDNO：23所示序列的基因；里氏木霉菌内源的苹果酸酶的编码基因为如SEQIDNO：26和SEQIDNO：29所示序列的基因；里氏木霉菌内源的葡萄糖转运蛋白的编码基因为如SEQIDNO：32和SEQIDNO：35所示序列的基因。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 王玮 一种获取非转基因的里氏木霉定向基因工程改良株的方法和应用

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