申请/专利权人：广东省农业科学院果树研究所

申请日：2023-07-05

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN117004641B

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N5/10;A01H5/00;A01H6/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2023.11.24#实质审查的生效;2023.11.07#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种农杆菌介导的龙眼愈伤组织稳定转基因的方法，具体公开了一种获得稳定转基因的龙眼愈伤组织的方法，包括以下步骤：1将龙眼愈伤组织置于缓冲溶液中进行电击处理；2采用农杆菌介导法将外源基因整合到经过电击处理的龙眼愈伤组织中，即得到稳定转基因的龙眼愈伤组织。本发明提供的方法创新性使用电击法预处理龙眼愈伤组织后，能够使用常用的农杆菌侵染法获得稳定表达的转基因愈伤组织，方法操作简单，成本较低，可重复性高，为龙眼遗传转化提供技术资料，为龙眼遗传改良提供技术支撑，具有重要的理论和应用价值。

主权项：1.一种获得稳定转基因的龙眼愈伤组织的方法，包括以下步骤：（1）将龙眼愈伤组织置于缓冲溶液中进行电击处理；所述电击处理的条件为960μF、940Vcm处理8s；（2）采用农杆菌介导法将外源基因整合到经过电击处理的龙眼愈伤组织中，即得到稳定转基因的龙眼愈伤组织；步骤（2）具体包括：将龙眼愈伤组织浸入含有携带外源基因质粒载体的农杆菌浸染液中，25~30℃200~300rpm培养0.5~2h；取出龙眼愈伤组织，依次置于共培养基和筛选培养基中进行共培养和筛选培养；所述含有携带外源基因质粒载体为pCAMBIA2301载体；所述共培养基为MS+0.1mgL2,4-D+10gL葡萄糖+100μmolL乙酰丁香酮+7gL琼脂，pH=5.8；所述筛选培养基为MS+20gL蔗糖+120mgL卡那霉素+200mgL头孢霉素+7gL琼脂，pH=5.8。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省农业科学院果树研究所 一种农杆菌介导的龙眼愈伤组织稳定转基因的方法

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