申请/专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

申请日：2024-01-12

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778629A

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明提供一种利用三重RT‑qPCR检测蜱传脑炎、乙型脑炎和山羊关节炎脑炎的方法及试剂盒，属于分子生物学和核酸检测领域。该方法通过设置针对蜱传脑炎的C基因、乙型脑炎病毒的NS2A基因和山羊关节炎脑炎病毒基因组的gag基因的三组引物对和探针，通过RT‑qPCR方式测定达到荧光值的Ct值，依据判定规则确定是否感染病毒以及种类，该检测方法具有检测灵敏度高，特异性好、操作简便、快速的特点，适合在实际检测中推广应用。

主权项：1.一种利用三重RT-qPCR检测蜱传脑炎、乙型脑炎和山羊关节炎脑炎的方法,其具体包括如下步骤：1以蜱传脑炎的C基因、乙型脑炎病毒的NS2A基因和山羊关节炎脑炎病毒基因组的gag基因作为PCR扩增的靶序列分别设计合成特异性的引物和TaqMAN—MGB探针；2获取待测样本，将待测样本进行三重RT-qPCR扩增，同时设定阳性对照和阴性对照，扩增反应体系为2x实时荧光PCR预混液、10pmolμL上游引物、10pmolμL下游引物、10pmolμL探针，反应总体积为20μL；PCR反应条件为95℃，2min；l个循环；95℃，10s；1个循环；95℃，15s；53℃，15s；40个循环；3分别选择荧光检测模式为FAM、HEX、ROX进行荧光检测，将3-15循环的荧光信号值定为基线，基线标准差的10倍定义为值，荧光信号值达到值时的PCR循环数定义为Ct值，根据Ct值的判定标准确定待测样本中是否感染病毒以及病毒种类。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) 一种利用三重RT-qPCR检测蜱传脑炎、乙型脑炎和山羊关节炎脑炎的方法及试剂盒

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