申请/专利权人：中国热带农业科学院三亚研究院;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所;中国热带农业科学院海口实验站

申请日：2023-12-26

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778452A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;A01H6/82;A01H5/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明提出一种促进汞从烟草根部向地上部转运的方法，包括：1提取烟草叶片总RNA，反转录成cDNA，进行PCR；2用PCR产物进行BPclonase反应，对大肠杆菌感受态细胞Top10进行转化，得到质粒pENTR‑ABCCR；3用pENTR‑ABCCR进行LRclonase反应，对大肠杆菌感受态细胞Top10进行转化，获得质粒pSGRNAi‑ABCCR；4将pSGRNAi‑ABCCR转化进入土壤农杆菌GV3101；5将烟草叶片切块，侵染，培养，对长出的烟草幼苗进行PCR，再进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。本发明构建的烟草株系能够显著提高汞从根部向地上部组织转运的能力。

主权项：1.一种促进汞从烟草根部向地上部转运的方法，其特征在于，包括如下步骤：1提取烟草叶片总RNA，反转录成cDNA，利用SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的引物进行PCR；2利用PCR产物进行BPclonase反应，反应产物转化进入大肠杆菌感受态细胞Top10，提取质粒，获得反应产物pENTR-ABCCR；3用pENTR-ABCCR进行LRclonase反应，最终反应产物转化进入大肠杆菌感受态细胞Top10，提取质粒，进行PvuII酶切处理，对酶切片段测序，获得含有正确序列的质粒pSGRNAi-ABCCR；4将质粒pSGRNAi-ABCCR转化进入土壤农杆菌GV3101；5将烟草叶片切块，用步骤4所得农杆菌侵染，在培养基上培养，利用SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的引物对长出的烟草幼苗进行PCR，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，筛选成功植株获得烟草RNAi株系。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国热带农业科学院三亚研究院;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所;中国热带农业科学院海口实验站 一种促进汞从烟草根部向地上部转运的方法

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