申请/专利权人：浙江大学绍兴研究院

申请日：2023-12-12

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778433A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/10;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明属于生物医药学领域，一种从大肠杆菌中提取质粒的高效稳定方法包括以下步骤：菌体重悬；裂解：向菌体重悬液中加入含有精氨酸的碱性裂解液；中和；澄清；浓缩换液以及层析纯化。本发明提供一种提高大肠杆菌裂解过程中超螺旋质粒稳定性的简单方法。本方法不仅可以提高超螺旋质粒的回收率，减少在裂解过程中开环质粒的生成，还可以减少质粒纯化的层析步骤，方便快捷，适于推广应用。

主权项：1.一种从大肠杆菌中提取质粒的高效稳定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、菌体重悬：将发酵收获的大肠杆菌湿菌体加入含有葡萄糖的重悬液中搅拌均匀，让菌体充分重悬制得菌体重悬液；葡萄糖的质量浓度为2.5％～5％；加入重悬液重量与湿菌体质量的比例为10：1；S2、裂解：向菌体重悬液中加入重悬液等量的含有0.05-0.2M终浓度精氨酸的碱性裂解液，混合搅拌均匀使菌体裂解；S3、中和：加入与裂解液等量的酸性中和液混合搅拌均匀使裂解停止；S4、CaCl2处理：加入0.2-0.8M的CaCl2静置；S5、澄清：过滤得到澄清收获液，过滤为二级过滤，一级过滤为孔径20-40微米的滤器，二级过滤为孔径1微米的滤器；S6、浓缩换液：将澄清收获液进行浓缩，分别选用50KDa的中空纤维进行浓缩换液，并换液到换液缓冲液中；S7、层析纯化：将浓缩换液的样品进行一步层析纯化，通过层析纯化获得初步的质粒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学绍兴研究院 一种从大肠杆菌中提取质粒的高效稳定方法

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