申请/专利权人：吉林大学

申请日：2024-01-23

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117887762A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/50;C12N15/51;C12N15/18

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.03#实质审查的生效;2024.04.16#公开

摘要：猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒及其构建方法与应用，属于遗传平台技术领域。本发明的构建方法，先消除PBeloBAC11载体上的两个KpnI酶切位点，然后在pBeloBAC11的5'末端引入人巨细胞病毒启动子和猪血凝性脑脊髓炎病毒5'UTR，在pBeloBAC11的3'末端引入猪血凝性脑脊髓炎病毒3'UTR、PolyA、丁型肝炎病毒核酶序列以及牛生长素，并插入多克隆酶切位点，得到修饰的pBeloBAC11载体；再采用八个酶切位点将猪血凝性脑脊髓炎病毒全基因组分割为五个基因片段，并扩增，最后将扩增后的基因片段连接至修饰的pBeloBAC11载体上。该克隆质粒可作为反向遗传平台。

主权项：1.猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、先消除PBeloBAC11载体上的两个KpnI酶切位点，然后在pBeloBAC11的5'末端引入人巨细胞病毒启动子和猪血凝性脑脊髓炎病毒5'UTR，在pBeloBAC11的3'末端引入猪血凝性脑脊髓炎病毒3'UTR、PolyA、丁型肝炎病毒核酶序列以及牛生长素，并在得到的改造后的pBeloBAC11上插入多克隆酶切位点，得到修饰的pBeloBAC11载体；步骤二、采用以下八个酶切位点ApaL1、SacII、KpnI、KpnI、NarI、PacI、BamHI、HindIII将猪血凝性脑脊髓炎病毒全基因组依次分割为A、B、C、D、E五个基因片段，并分别采用扩增引物扩增，然后将扩增后的A、C、D、E四个基因片段以任意顺序依次连接至修饰的pBeloBAC11载体上，最后将扩增后的B基因片段连接至修饰的pBeloBAC11载体上，得到猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林大学 猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒及其构建方法与应用

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