申请/专利权人：温州医科大学附属眼视光医院

申请日：2023-09-25

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117805360A

主分类号：G01N33/53

分类号：G01N33/53;C12N15/115;C12N15/867;C12N5/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：一种联合细胞筛选与功能筛选靶向GPCR蛋白的功能核酸适体筛选方法及应用，通过针对目的蛋白的细胞筛选，保持目的蛋白的天然构型，得到的核酸适体相较于传统的蛋白SELEX得到的核酸适体拥有更好体内特异性与靶向性，构建模型细胞的Cell‑SELEX,相较于传统靶标不明确的Cell‑SELEX技术，具有更强的针对性，本发明可以在一次筛出一系列靶标适体后，仅在细胞中进行一轮功能筛选，就可以直接得到可以影响靶蛋白信号通路，影响细胞表型的功能适体，具有针对性强，亲和力高，经济，人力成本低，方法广谱通用性等优点。

主权项：1.一种联合细胞筛选与功能筛选靶向GPCR蛋白的功能核酸适体筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建并验证细胞筛选的稳定模型细胞；（2）构建筛选文库；（3）将所述筛选文库采用细胞筛选富集得到富集文库；（4）细胞筛选后富集文库测序；（5）候选适体进行家族分析及占比率分析；（6）候选适体亲和力、特异性分析：包括流式确实筛选得到适体的靶标亲和力；Pull-down实验验证适体的靶标蛋白；目的蛋白敲降实验验证适体的靶标蛋白；组织切片与抗体定位验证适体的靶标蛋白；（7）候选适体进行针对第二信使cAMP的功能筛选；（8）筛选功能适体对细胞表型的功能检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 温州医科大学附属眼视光医院 一种联合细胞筛选与功能筛选靶向GPCR蛋白的功能核酸适体筛选方法及应用

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