申请/专利权人：北京力邦生物医药科技有限公司

申请日：2023-12-29

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802130A

主分类号：C12N15/66

分类号：C12N15/66;C12N15/70

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明提供了一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法及应用，包括以下步骤：S1，准备连接用的目的基因和载体，进行双酶切产生粘性末端；S2，在酶切后的载体中加入CIP酶进行去磷化；S3，将酶切后的目的基因和载体跑胶，胶液为质量百分比为1％琼脂糖胶，采用QIAGEN胶回收试剂盒，切胶回收目的基因片段和载体，切胶后在琼脂糖凝胶中加入3倍体积的缓冲液QG，50℃温度下加热10min溶解，每两分钟混匀一次，使胶完全溶解，添加1倍体积的异丙醇，放置室温，将溶解后的胶转移至QIAquick旋转柱，离心；本发明通过优化QIAGEN胶回收试剂盒回收方式，提高回收片段的质量；延长转化后stbl3感受态培养时间，可提高克隆数量。

主权项：1.一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，准备连接用的目的基因和载体，进行双酶切产生粘性末端；S2，在酶切后的载体中加入CIP酶进行去磷化；S3，将酶切后的目的基因和载体跑胶，胶液为质量百分比为1％琼脂糖胶，采用QIAGEN胶回收试剂盒，切胶回收目的基因片段和载体，切胶后在琼脂糖凝胶中加入3倍体积的缓冲液QG，50℃温度下加热10min溶解，每两分钟混匀一次，使胶完全溶解，添加1倍体积的异丙醇，放置室温，将溶解后的胶转移至QIAquick旋转柱，离心；S4，按片段和载体比例为3～9：1进行条件摸索；S5，室温20min，外加16℃过夜连接；S6，转化连接产物5μl到50μlStbl3感受态细胞中，加250μlSOC培养基32℃，225rpm培养1h，或者补加带抗性的培养基过夜培养；S7，取培养后菌液进行涂板，挑取菌落形态大小均一的菌落进行培养32℃，225rpm过夜培养；S8，选取载体中插入目的基因前后的序列设计引物，对挑取的单克隆进行PCR鉴定。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京力邦生物医药科技有限公司 一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法及应用

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