申请/专利权人：中国地质科学院岩溶地质研究所

申请日：2024-01-05

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117801055A

主分类号：C07K1/14

分类号：C07K1/14;G01N21/33;G01N21/78

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.02#公开

摘要：本发明属于土壤碳与全球气候变化研究领域，公开了影响喀斯特土壤碳汇潜力的易提取球囊霉素相关土壤蛋白EasilyExtractableGlomalin‑relatedSoilProtein,EE‑GRSP的优化提取方法。球囊霉素相关土壤蛋白Glomalin‑relatedSoilProtein,GRSP被认为是唯一来源于丛枝菌根真菌的糖蛋白，其不但是土壤碳汇的稳定组分，也是土壤碳汇变化的指示器。其中，EE‑GRSP是新产生的，且在GRSP组分中性质活跃，能胶结土壤团聚体，保持团聚体及土壤碳汇的稳定性。碳酸盐岩经风化作用并在地形、植被、母质、气候、时间及生物等因素的影响下可逐渐演替出不同类型喀斯特土壤。以不同类型喀斯特土壤中的EE‑GRSP为研究对象，通过温度和时间正交实验，筛选出适用于喀斯特全土、颗粒态有机质和矿物结合态有机质的EE‑GRSP提取条件，进而解决EE‑GRSP提取不充分的科学问题。

主权项：1.影响喀斯特土壤碳汇潜力的易提取球囊霉素相关土壤蛋白提取方法优化，其特征在于所述提取步骤如下：1.步骤S1，准备如下器具：15mL离心管若干、2mL离心管若干、移液枪、1000μL枪头若干、洗耳球、5mL一次性移液管、试管架、立式压力蒸汽灭菌器、台式高速离心机、紫外分光光度计。2.步骤S2，准备如下试剂：20mmolL柠檬酸钠溶液pH＝72L、1000μgL牛血清蛋白标准BovineSerumAlbumin，BSA溶液100mL、考马斯亮蓝G-250染色剂1L、超纯水1L。3.步骤S3，从0-20cm喀斯特土层随机采集未扰动四个类型的土壤样品[黑色石灰土BKC、棕色石灰土BWC、黄色石灰土YWC和红色石灰土RDC]，每个采样点取三个重复。将采集到的大块土壤沿缝隙轻轻掰开，剔除石砾、残根等杂物，混合均匀，获得全土。用湿筛仪将全土筛分为颗粒态有机质POM，53um和矿物结合态有机质MAOM，53um，风干样品，过10目筛。4.步骤S4，由于喀斯特土壤富含高有机质，故称取BWC和RDC全土、POM各0.5g于15mL离心管中，按照1:8比例加入pH＝7的20mmolL柠檬酸钠溶液，混合均匀，打开离心管盖，将离心管置于试管架中，放入立式压力蒸汽灭菌器。按照121℃、123℃、125℃温度梯度和40min、60min、80min时间梯度进行正交实验提取。5.步骤S5，提取时间和温度结束后，等待立式压力蒸汽灭菌器压力降至0，温度降至80℃以下后开启灭菌器。用0-1000μL移液枪将离心管中的提取液转移至2mL离心管中。配平后放入高速离心机9500rmin离心10min。6.步骤S6，使用移液枪将离心管中上清液转移至全新2mL离心管中获得EE-GRSP原液，可置于4℃冰箱中保存备用。7.步骤S7，参照Bradford蛋白测定法对EE-GRSP进行测定，取4mLEE-GRSP原液，加入2mL考马斯亮蓝G-250染色剂，显色5min于595nm波长下比色。用BSA作标准液，考马斯亮蓝法显色，绘制标准曲线，以1.00g土壤中蛋白质的微克数表示EE-GRSP含量。获取BWC和RDC全土样品最佳提取时间为40min、提取温度为121℃；BWC和RDC的POM最佳提取时间为80min、提取温度为123℃。8.步骤S8，重复上述步骤，对黑色石灰土BKC、棕色石灰土BWC、黄色石灰土YWC和红色石灰土RDC的全土、POM及MAOM利用优化条件进行EE-GRSP验证提取。

全文数据：

权利要求：

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