申请/专利权人：江苏科技大学

申请日：2023-12-15

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802159A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/65;G01N21/64

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了家蚕蛋白互作验证系统BiFC‑mCherry及其构建方法和应用，将·pIZ‑mCherry‑N‑待检测基因A‑V5His和pIZ‑mCherry‑C‑待检测基因B‑V5His质粒共转染BmN细胞，来判断家蚕的两个蛋白是否具有相互作用。与现有技术相比，本发明具有以下优点：1本发明试验周期短，操作简便，便于观察。2本发明灵敏度强，可检测弱相互作用或瞬时相互作用。3本发明所述方法验证得到的蛋白互作关系符合体内实际情况，结果可信度高。

主权项：1.家蚕蛋白互作验证系统BiFC-mCherry的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1、设计特异性引物，将红色英光蛋白mCherry切割为mCherry-N和mCherry-C片段，其中mCherry-N的正向引物序列为SEQIDNO:1，mCherry-N的反向引物序列为SEQIDNO:2；mCherry-C的正向引物序列为SEQIDNO:3，mCherry-C的反向引物序列为SEQIDNO:4；S2、将S1切割的mCherry-N和mCherry-C片段分别构建至昆虫表达载体pIZ-V5His上，并添加连接序列Linker，得到空载体pIZ-mCherry-N-V5His和pIZ-mCherry-C-V5His；S3、将家蚕体内已知互作的两个蛋白的CDS区片段分别连接至S2构建的空载体pIZ-mCherry-N-V5His和pIZ-mCherry-C-V5His的C端；S4、将BmN细胞接种至12孔细胞板，在转染前将细胞培养液替换成90％TC-100+10％胎牛血清的无抗培养基；S5、S4中细胞培养24h内，将S3构建的两组质粒转染入S4培养的细胞内，转染后6h更换细胞培养液，25℃培养箱连续培养48h；S6、将S5培养的细胞置于倒置荧光显微镜下，观察其红色荧光分布情况，判断BiFC-mCherry系统构建结果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏科技大学 家蚕蛋白互作验证系统BiFC-mCherry及其构建方法和应用

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