申请/专利权人：通用生物(安徽)股份有限公司

申请日：2023-12-05

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802158A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N5/10;C12N15/37;C12R1/91

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种表达大T抗原的293悬浮细胞系的构建方法，属于基因工程技术领域，通过序列合成、载体构建、质粒转染和细胞株筛选等步骤制得一种表达大T抗原的293悬浮细胞系，而后对构建好的细胞系通过RNA提取，反转录而后进行定量PCR检测大T抗原的相对表达量，得到高表达大T抗原的293悬浮细胞系，将包含重组蛋白编码基因的序列构建到常规的真核蛋白表达载体里，进行质粒大抽之后，分别转染293细胞和最终构建好的293‑LTS细胞，然后进行基因表达水平的检测，最终构建好的高表达大T抗原的293悬浮细胞系可以用于重组蛋白及重组抗体表达的宿主细胞，有助于提高转染效率和目标蛋白的表达量。

主权项：1.一种表达大T抗原的293悬浮细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：从NCBI网站上查找大T抗原序列，根据大T抗原序列进行基因合成并引入同源重组臂，得到成片段；步骤二：将pIRES-neo3质粒使用EcoRV和BamHI限制性内切酶线性化后进行胶回收，得到的线性化载体，将合成片段使用PCR引物进行PCR扩增，然后胶回收PCR产物，将PCR产物和线性化载体无缝克隆后挑取克隆后的单菌落进行菌落PCR；步骤三：将菌落PCR片段大小正确的菌落扩大培养后进行质粒抽提，得到pIRES-LargeT-ires-neo3质粒；用pIRES-LargeT-ires-neo3质粒转染293悬浮细胞；步骤四：将转染48h后的293悬浮细胞进行NEO药物筛选，得到293-LTS细胞系；对293-LTS细胞系的大T抗原进行qPCR定量检测后对293-LTS细胞系的表达效果进行检测，得到表达大T抗原的293悬浮细胞系。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 通用生物(安徽)股份有限公司 一种表达大T抗原的293悬浮细胞系的构建方法

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