申请/专利权人：杭州同舟生物技术有限公司

申请日：2022-04-25

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN114790203B

主分类号：C07D451/10

分类号：C07D451/10;C07K14/765;C07K16/44;C07K1/02;C07K1/107;G01N33/94;G01N33/577;G01N33/531

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.08.12#实质审查的生效;2022.07.26#公开

摘要：本发明公开了一种东莨菪碱人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。东莨菪碱人工半抗原的分子结构如式（Ⅰ），东莨菪碱人工抗原的分子结构如式（Ⅱ）。本发明的东莨菪碱人工半抗原最大程度的保留了东莨菪碱的特征结构，且在远离这些主要特征结构的端位上引入了能与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的东莨菪碱人工抗原可进行小鼠免疫获得高亲和力、高灵敏度、强特异性的抗东莨菪碱单克隆抗体，可用于对东莨菪碱进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

主权项：1.一种东莨菪碱人工抗原的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）东莨菪碱人工半抗原Ⅰ-Ⅰ的制备：①称取氢溴酸三水东莨菪碱200mg溶于10ml纯化水中，用浓氨水调节溶液的pH=9，再用3*20ml二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸镁干燥、过滤、浓缩得微白色油状物A132mg；对该微白色油状物A进行TLC检测，层析液按照体积比为二氯甲烷：95%乙醇：1,4-二氧六环：氨水=10:8:1:1，产物Rf=0.9；②将微白色油状物A132mg溶于10ml吡啶中，再加入丁二酸酐87mg和4-二甲氨基吡啶13mg，在100℃的油浴中回流搅拌反应18小时；反应结束后，自然冷却至室温，减压蒸干溶剂得棕黑色油状物，加入20ml二氯甲烷溶解残渣，用2*20ml纯化水洗涤有机相，收集有机相，用无水硫酸镁干燥、过滤、减压蒸干得棕黑色油状残渣，该残渣经薄层色谱，溶剂和洗脱剂为无水乙醇，展开剂按照体积比为二氯甲烷：95%乙醇：1,4-二氧六环：氨水=10:8:1:1，产物的Rf=0.3，分离得淡黄色油状物Ⅰ-Ⅰ63mg，即所述的东莨菪碱人工半抗原Ⅰ-Ⅰ； 2东莨菪碱人工抗原Ⅱ-Ⅰ的制备：③取东莨菪碱半抗原Ⅰ-Ⅰ63mg与N-羟基琥珀酰亚胺24mg、环己基碳酰二亚胺43mg置于25ml的单口圆底烧瓶中，加入3.15mlN,N-二甲基甲酰胺溶解，室温下搅拌反应18小时，有大量的白色沉淀产生，反应结束后以8000rmin离心10分钟，弃沉淀，取上清液，备用；④称取14.5g十二水磷酸氢二钠，43.875g氯化钠，1.495g二水磷酸二氢钠用纯化水溶解定容至5.0L，得到0.01M的PBS缓冲液，pH为7.4；⑤称取160mg牛血清蛋白溶于32mlPBS缓冲液中，搅拌均匀，得到浓度为5mgml的牛血清蛋白溶液；⑥室温下，将③的上清液缓慢滴加到快速搅拌的⑤的溶液中，上清液与牛血清蛋白溶液的体积比为1:10，滴加完毕继续搅拌反应0.5小时，得到的混合液在4℃条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液；⑦将人工抗原混合液移入透析袋中，用步骤④的PBS缓冲液透析7次，透析结束后以10000rmin离心10分钟，弃沉淀，取上清液即得到如式Ⅱ-Ⅰ所示人工抗原：东莨菪碱-牛血清蛋白偶联物； 。

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百度查询： 杭州同舟生物技术有限公司 一种东莨菪碱人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用

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