申请/专利权人：华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司

申请日：2019-06-21

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN112111528B

主分类号：C12N15/90

分类号：C12N15/90;C12N9/22;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2021.02.23#实质审查的生效;2020.12.22#公开

摘要：本发明公开一种内含子异常剪接的修复方法，所述方法为一种利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术靶向敲除β‑地中海贫血地贫中异常突变位点IVS2‑654CT的技术，通过设计并合成能识别引导Cas9蛋白至目标基因靶序列的引导RNA序列sgRNA，将其与Cas9蛋白混合物电转导入β‑地贫IVS2‑654CT造血干细胞中，高效破坏该异常剪接突变位点，从而恢复β‑珠蛋白基因的正常剪切和表达。本发明可利用现有基因编辑技术编辑输血依赖型β‑地贫IVS2‑654CT，编辑效率高，编辑后的病人造血干细胞在自体移植后可以重建病人血液系统并治疗地中海贫血疾病。

主权项：1.一种修复细胞中由于β-珠蛋白基因IVS2-654CT的突变导致的内含子异常剪接的CRISPR-Cas9系统在制备细胞治疗制剂中的应用，所述IVS2-654CT的突变引入额外的剪接供体位点导致内含子异常剪接，其特征在于：所述CRISPR-Cas9系统对β-珠蛋白基因进行基因编辑；所述CRISPR-Cas9系统包括Cas9和靶向目标序列的sgRNA；所述的靶向目标序列的sgRNA为：1靶向序列为CAGTGATAATTTCTGGGTTA的sgRNA–1；或2靶向序列为CAGTGATAATTTCTGGGTTA的sgRNA–1，和靶向序列为TAAATTGTAACTGATGTAAG的sgRNA–2；所述sgRNA的靶向位点在IVS2-654CT位点的上游20bp至IVS2-654CT位点的下游70bp范围内；所述的细胞治疗为针对地中海贫血的细胞治疗，所述细胞为造血干细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司 一种内含子异常剪接的修复方法

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