申请/专利权人：中国科学院微生物研究所

申请日：2022-10-08

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844839A

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N15/53;C12N15/31;C12N1/21;C05F11/08;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明公开了一种组成型表达铁固氮酶的耐铵光合固氮菌及其构建与应用。本发明公开的组成型表达铁固氮酶的耐铵光合固氮菌，其构建方法包括：敲除受体菌的vnfHDGK基因、anfHDGK或anfHDGK123基因、nifHDK基因，并导入由nifH基因启动子驱动表达的anfHDGK或anfHDGK123基因，得到目的菌。本发明的耐铵光合固氮菌，解除了铵对固氮酶表达的抑制，实现了铁固氮酶的组成型表达，有铵条件下的固氮效率显著高于野生型菌株CGA009。本发明的耐铵基因工程菌满足工业生产需求，具有广阔的商业价值。

主权项：1.一种重组菌的制备方法，包括对受体菌进行包括如下1-4的改造，得到重组菌：1敲除所述受体菌的VnfH蛋白质的编码基因、VnfD蛋白质的编码基因、VnfG蛋白质的编码基因和VnfK蛋白质的编码基因，或抑制所述VnfH蛋白质的编码基因、所述VnfD蛋白质的编码基因、所述VnfG蛋白质的编码基因和所述VnfK蛋白质的编码基因的表达，或抑制所述VnfH蛋白质、所述VnfD蛋白质、所述VnfG蛋白质和所述VnfK蛋白质的活性；2包括2A或2B：2A敲除所述受体菌的AnfH蛋白质的编码基因、AnfD蛋白质的编码基因、AnfG蛋白质的编码基因、AnfK蛋白质的编码基因，或抑制所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因和所述AnfK蛋白质的编码基因的表达，或抑制所述AnfH蛋白质、所述AnfD蛋白质、所述AnfG蛋白质和所述AnfK蛋白质的活性；2B敲除所述受体菌的所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因、所述AnfK蛋白质的编码基因、Anf1蛋白质的编码基因、Anf2蛋白质的编码基因和Anf3蛋白质的编码基因，或抑制所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因、所述AnfK蛋白质的编码基因、所述Anf1蛋白质的编码基因、所述Anf2蛋白质的编码基因和所述Anf3蛋白质的编码基因的表达，或抑制所述AnfH蛋白质、所述AnfD蛋白质、所述AnfG蛋白质、所述AnfK蛋白质、所述Anf1蛋白质、所述Anf2蛋白质和所述Anf3蛋白质的活性；3敲除所述受体菌的NifH蛋白质的编码基因、NifD蛋白质的编码基因和NifK蛋白质的编码基因，或抑制所述NifH蛋白质的编码基因、所述NifD蛋白质的编码基因和所述NifK蛋白质的编码基因的表达，或抑制所述NifH蛋白质、所述NifD蛋白质和所述NifK蛋白质的活性；4包括4A或4B：4A向所述受体菌中导入所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因和所述AnfK蛋白质的编码基因，并使所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因和所述AnfK蛋白质的编码基因得到表达；4B向所述受体菌中导入所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因、所述AnfK蛋白质的编码基因、所述Anf1蛋白质的编码基因、所述Anf2蛋白质的编码基因和所述Anf3蛋白质的编码基因，并使所述AnfH蛋白质的编码基因、所述AnfD蛋白质的编码基因、所述AnfG蛋白质的编码基因、所述AnfK蛋白质的编码基因、所述Anf1蛋白质的编码基因、所述Anf2蛋白质的编码基因和所述Anf3蛋白质的编码基因得到表达。

全文数据：

权利要求：

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