申请/专利权人：山东省林草种质资源中心(山东省药乡林场)

申请日：2023-12-22

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844850A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/00;C12Q1/6895

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明提供农杆菌介导的五莲杨遗传转化方法及其检测方法，所述遗传转化方法，包括如下步骤：1以成熟叶片中间部分为外植体，置于添加乙酰丁香酮的农杆菌重悬液中侵染，得到侵染样本；2侵染后的叶片放入共培养基中进行暗培养，共培养结束后按照“3‑3‑7‑3”方式进行不定芽筛选培养；4将步骤3得到的筛选抗性芽转入生根筛选固体培养基中继续培养35d。检测方法为双筛法，抗性生根苗炼苗移栽自然光下培养30d后，分别进行DNA和RNA水平检验，确定基因的稳定性转化。本发明首次以五莲杨叶片中间部位为外植体进行农杆菌侵染的直接器官发生方式建立高效遗传转化体系，诱导五莲杨叶片产生较多数量的不定芽，提高阳性转化率和阳性植株鉴定效率。

主权项：1.一种农杆菌介导的五莲杨遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1以五莲杨成熟叶片的中间部分为外植体，置于添加β-AS的农杆菌重悬液中侵染，得到侵染样本；2侵染后的叶片放入共培养基中，暗培养3d；3共培养结束后，按照“3-3-7-3”方式进行不定芽筛选培养，起初每3d更换一次不定芽筛选固体培养基，连续操作3次后，每7d更换一次不定芽筛选培养基，所述不定芽筛选培养基为12NH4NO3MS+0.05mgLNAA+0.5mgL6-BA+25gL蔗糖+7.0gL琼脂粉，直至培养35d；4将步骤3得到的筛选抗性芽转入生根筛选固体培养基中继续培养35d。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东省林草种质资源中心(山东省药乡林场) 农杆菌介导的五莲杨遗传转化方法及其检测方法

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