申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2023-12-29

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778463A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明提供了一种基于农杆菌转化法获得无外源DNA整合的CRISPR编辑白桦或山新杨的转基因方法，涉及基因工程技术领域。包括：将sgRNA克隆到pEgP237‑2A载体中，得到克隆载体；将克隆载体转化到根癌农杆菌中，得到转化菌；将转化菌通过瞬时转化技术侵染白桦或山新杨植株，得到转化植株；将转化植株经过2次热处理。该方法利用根瘤农杆菌介导的遗传转化来产生CRISPR编辑的植物。与根瘤农杆菌介导的经典转基因技术相比，该方法可以显著提高转化效率，并且还可以用于在没有外源DNA整合的情况下高效地产生基因组编辑植物。因此，该方法可能在CRISPRCas介导的基因组编辑中具有广泛的应用。

主权项：1.一种基于农杆菌转化法获得无外源DNA整合的CRISPR编辑白桦或山新杨的转基因方法，其特征在于，包括以下步骤：1将sgRNA克隆到pEgP237-2A载体中，得到克隆载体；所述sgRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.1或2所示；SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编辑白桦，SEQIDNo.2所示的核苷酸序列编辑山新杨；2将所述步骤1得到的克隆载体转化到根癌农杆菌中，得到转化菌；3将所述步骤2得到的转化菌通过瞬时转化技术侵染白桦或山新杨植株，分别得到转化植株；4将所述步骤3得到的转化植株经过2次热处理，得到热处理材料；所述热处理的温度为37℃；5将所述步骤4得到的热处理材料切割成外植体，将所述外植体在ABI培养基上培养，得到不定芽；6将所述步骤5得到的不定芽在RM培养基上培养。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 沈阳农业大学 一种基于农杆菌转化法获得无外源DNA整合的CRISPR编辑白桦或山新杨的转基因方法

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