申请/专利权人：南通大学

申请日：2021-11-19

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114088952B

主分类号：C12Q1/68

分类号：C12Q1/68;G01N33/68;G01N33/574

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.03.15#实质审查的生效;2022.02.25#公开

摘要：本发明提供一种基于CRISPR‑Cas12a传感系统的PPIs检测平台及检测方法，用于p53‑MDM2相互作用监测和抑制剂疗效评价。所述检测方法包括如下步骤：对Cas‑PPIor进行探针设计及Cas‑PPIor可行性进行验证；Cas‑PPIor用于p53‑MDM2相互作用研究及抑制剂效力评价；Cas‑PPIor用于细胞内蛋白相互作用检测。本发明开发了基于CRISPR‑Cas12a传感系统的PPIs检测平台，可以实现有效的p53‑MDM2相互作用过程监测以及小分子拮抗剂的抑制作用效力评估。

主权项：1.一种基于CRISPR-Cas12a传感系统的PPIs检测平台，其特征在于，所述PPIs检测平台用于p53-MDM2相互作用监测和抑制剂疗效评价；所述PPIs检测平台的构建方法是将PAM结构域整合到特定的p53DNA结合结构域中，将蛋白质相互作用事件转换到Cas12a的反式裂解活性中；所述PPIs检测平台的构建方法包括设计Cas-PPIor探针dsDNA，所述dsDNA通过将终浓度为1μM的p53-T和p53-T-PAM在1×TAMg缓冲液中从95℃退火至4℃，获得激活双链；所述构建方法使用的序列为： 名称 5’-3’ p53-T GGGCATGTCTGGGCATGTCTTAAACGGCCACAAGC p53-T-PAM GCTTGTGGCCGTTTAAGACATGCCCAGACATGCCC p53-sgRNA UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAGACAUGCCCAGACAUGCCC p53-T-PAM-Biotin Biotin-GCTTGTGGCCGTTTAAGACATGCCCAGACATGCCC Substrate 6-FAM-AATAA-HBQ1 。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南通大学 基于CRISPR-Cas12a传感系统的PPIs检测平台及检测方法

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