申请/专利权人：石河子大学

申请日：2024-01-10

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117849254A

主分类号：G01N30/86

分类号：G01N30/86;G01N30/02

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明涉及医药领域，具体公开了有一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法。所述药用大蒜指纹图谱的构建方法包括：利用超纯水制备供试样品溶液、对照品溶液的步骤和超高效液相色谱分析步骤。根据本发明的方法简单、色谱分析条件容易实现、精密度高，而且分析结果的稳定性和重现性较好，与现有技术的其他测试分析方法相比，缩短了在线分析时间，节省了材料成本和时间成本；同时本发明的检测方法以蒜氨酸为参比峰，确定并指认了18个共有峰，指纹图谱组成丰富全面，是一种可靠简便的药用大蒜品质评价方法。

主权项：1.一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，包括一下步骤：步骤一：供试品溶液的制备：取去皮鲜蒜约10.0g，精密称重，加入30mL超纯水，中高火微波灭蒜氨酸酶1～10min，冷却。匀浆5min，浆液倒入50mL离心管，10mL超纯水冲洗匀浆机，洗液合并至50mL离心管中，超声提取5～15min后离心4000～7000r·min-15～15min，上清液转移至100mL容量瓶中，沉淀加水20mL，充分摇匀，再次超声离心0～2次，上清液合并至100mL容量瓶中，加超纯水定容至刻度，摇匀，取1.2mL该溶液至10mL容量瓶中，用超纯水定容，作为供试品溶液；步骤二：混合对照品溶液的制备：称取氨基酸对照品，置于同一25mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，作为对照品溶液，所述氨基酸如下： 步骤三：样品溶液的衍生化反应：衍生化试剂配制：三乙胺乙腈溶液1mol·L-1：称取三乙胺13.5mL，置100mL容量瓶，加乙腈稀释并定容刻度，摇匀即得；异硫氰酸苯酯乙腈溶液0.1mol·L-1：称取异硫氰酸苯酯1.2mL，置100mL容量瓶，加乙腈稀释并定容刻度，摇匀即得；衍生化反应：准确移取对照品溶液或供试品溶液或超纯水溶液2mL，分别加入0.1mol·L-1异硫氰酸苯酯乙腈溶液1mL，1mol·L-1三乙胺乙腈溶液1mL，振摇混匀，室温放置30min，加入正己烷4mL，充分振摇混匀后，离心6000r·min-1，25℃5min，弃上层溶液，再次加入正己烷4mL萃取，离心6000r·min-1，25℃5min，吸取下层溶液，用0.45μm滤膜滤过，即得对照品衍生化溶液或供试品衍生化溶液或阴性对照衍生化溶液；步骤四：确定UPLC的色谱条件：ACEExcel1.7SuperC18色谱柱100mm×2.1mm，1.7μm；柱温：25～40℃；流速：0.1～0.6mL·min-1；测定波长：210～310nm；进样体积：0.5～2μL；流动相：流动相A：称取8.2g三水醋酸钠，置1000mL烧杯中，加超纯水600mL，搅拌溶解，以冰醋酸调pH值至6.5，加乙腈45mL，混匀，用0.45μm滤膜过滤；流动相B为甲醇：乙腈：水＝20：60：20VVV；采用梯度洗脱方式洗脱，梯度洗脱程序：0min→2min～13.6min→15.2min→16.8min→18min→20min，流动相B甲醇：乙腈：水＝20：60：20VVV10体积％→12体积％～65体积％→100体积％→100体积％→0体积％→0体积％；步骤五：超高效液相色谱测定：分别精密吸取上述步骤三中的供试品、对照品及阴性对照衍生化溶液，注入超高效液相色谱仪测定，记录色谱图；步骤六：建立指纹图谱：将对照品溶液色谱图和供试品溶液色谱图导入指纹图谱软件，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得药用大蒜药材的指纹图谱，比较待测样品的色谱图和标准指纹图谱相似度。

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