申请/专利权人：内蒙古金达威药业有限公司;厦门金达威集团股份有限公司;金达威生物技术(江苏)有限公司

申请日：2021-12-31

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN114317515B

主分类号：C12N11/14

分类号：C12N11/14;C12N1/14;C12N1/20;C12P19/30;C01B25/42;C01B33/12;C01G9/06;C12R1/38;C12R1/82;C12R1/07;C12R1/84

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2022.04.29#实质审查的生效;2022.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种以改性硅藻土为载体的固定化全细胞催化制备β‑烟酰胺单核苷酸的方法。将经过酸、碱处理后的改性硅藻土作为固定化载体，以分别含有多磷酸激酶Ppk、核酮糖‑5‑磷酸异构酶RKI1、磷酸核糖焦磷酸合成酶Prps以及烟酰胺磷酸核糖转移酶Nampt的菌株为对象来制备固定化细胞，再以D‑核糖、ATP、烟酰胺为原料，加入多磷酸激酶、核酮糖‑5‑磷酸异构酶、磷酸核糖焦磷酸合成酶以及烟酰胺磷酸核糖转移酶四种酶的组合用于催化反应合成β‑烟酰胺单核苷酸β‑NMN，转化率高。不仅提高了酶法合成β‑NMN的效率和底物转化率，而且其中的固定化细胞可以多次重复使用。

主权项：1.一种以改性硅藻土为载体的固定化全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.发酵液预处理：将各菌株单独发酵所得到的发酵液离心后收集下层菌泥，用适量去离子水洗涤菌泥，离心除去菌泥中残留的发酵液和其他杂质，离心后分别将四种湿菌泥与NaCl溶液按比例混合均匀，制成菌悬液；所述各菌株的菌种为施氏假单胞菌（Pseudomonasstutzeri）、产黄青霉（Penicilliumchrysogenum）、产磷酸核糖焦磷酸合成酶的解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）以及产烟酰胺磷酸核糖转移酶的毕氏酵母（Pichiapastoris）；S2.细胞固定化：在所得四种菌悬液中分别加入交联剂搅拌交联30～120min，再加入改性硅藻土进行吸附处理，静置60～180min后用二价金属离子溶液洗涤、离心2～3次，即可得到四种固定化细胞；所述改性硅藻土的制备：配制盐酸和氢氧化钠溶液，在盐酸溶液中加入硅藻土，浸泡刻蚀后用超纯水冲洗至滤液呈中性，再将酸改性后的硅藻土与氢氧化钠溶液混合刻蚀，冲洗，经高温烘干后过筛即得改性硅藻土；S3.酶催化反应：向含有D-核糖、烟酰胺、ATP、焦磷酸钾、MgSO4、ZnSO4以及BindingBuffer缓冲液，pH为6.0-7.5的底物溶液中添加上述制备好的四种固定化细胞，搅拌至质地均匀，并在整个反应过程中使搅拌速度维持在70rpm，控制反应体系的温度在30-40℃，保持pH在6.0-7.5之间，反应3-8h后得到烟酰胺单核苷酸粗品。

全文数据：

权利要求：

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