申请/专利权人：上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院

申请日：2022-06-24

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN115308317B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2022.11.25#实质审查的生效;2022.11.08#公开

摘要：本发明公开了一种糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分的高效液相色谱检测方法，所述糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分选自血竭素高氯酸盐、芦荟大黄素、大黄酸、欧前胡素、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚、丹参酮IIA。本发明提供的一种糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分的高效液相色谱检测方法，准确可靠、简便易行、专属性强，建立了该萃取物的质量标准，可用于糖尿病创面愈合萃取物的质量控制。

主权项：1.一种糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分选自血竭素高氯酸盐、芦荟大黄素、大黄酸、欧前胡素、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚、丹参酮IIA；所述糖尿病创面愈合萃取物的制备方法包括以下步骤：将质量比为2.5～3.5:1.3～2:2.5～3.5:2.5～3.5:1.3～2:2.5～3.5:2.5～3.5:1的黄芪、丹参、白芷、紫草、生大黄、炉甘石、珍珠粉、血竭回流提取两次；第一次加入上述药材总质量5～8倍的95％乙醇回流提取0.5～2h，第二次加入上述药材总质量5～8倍的95％乙醇回流提取0.5～2h，合并提取液，减压浓缩至浸干，加入水溶解，持续浓缩至无醇味为止获得混悬液；加入石油醚萃取至少三次，石油醚总用量与混悬液的质量比为1:1，合并石油醚萃取液后浓缩；继续在浓缩后溶液中加入氯仿萃取至少三次，氯仿总用量与浓缩后溶液的质量比为1:1，合并氯仿萃取液后浓缩；继续在浓缩后溶液中加入乙酸乙酯萃取至少三次，乙酸乙酯总用量与浓缩后溶液的质量比为1:1，合并乙酸乙酯萃取液后浓缩；继续在浓缩后溶液中加入饱和正丁醇的水溶液萃取至少三次，饱和正丁醇的水溶液总用量与浓缩后溶液的质量比为1:1，合并正丁醇萃取液后浓缩获得浸膏；将1ml浸膏溶于10mL甲醇中摇匀，用滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液用高效液相色谱分离纯化获得糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分；所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱：AgilentZorbaxEclipeXDB-C18，4.6mm×250mm，5μm，柱号：990967-902，流动相：A相为乙腈，B相为0.2％甲酸水溶液，梯度洗脱程序，流速：1mLmin，检测波长：254nm、270nm、440nm，柱温：30℃，进样量：10μL，进样前以流动相的梯度为初始条件平衡20min；所述梯度洗脱程序如下：0min～10min，30％A+70％B；11～50min，45％A+55％B；51min～60min，50％A+50％B；61～75min，65％A+35％B；76min～90min，65％A+35％B；91～95min，95％A+5％B；96min～110min，395％A+5％B；A相为乙腈，B相为0.2％甲酸水溶液。

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