申请/专利权人：北京全式金生物技术股份有限公司

申请日：2022-04-15

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN114891729B

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077;C12N5/0735;C12N5/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2022.08.30#实质审查的生效;2022.08.12#公开

摘要：本发明公开叶酸在促进人多能性干细胞向心肌细胞分化中的应用，并进一步公开了一种用于人多能性干细胞向心肌细胞分化的培养基组合。所述培养基组合包含第一诱导分化培养基、第二诱导分化培养基和或第三诱导分化培养基。本发明还公开了一种促进人多能性干细胞向心肌细胞分化的方法。本发明首次发现叶酸可以促进人多能性干细胞向心肌细胞分化，通过添加叶酸可在7‑10天将人多能性干细胞分化为可以搏动的人心肌细胞，15天可获得cTnT表达阳性比例高于80％的心肌细胞，大幅提高诱导人多能性干细胞分化获得心肌细胞的效率，为开发用于心肌细胞分化的培养基策略提供了新的见解。

主权项：1.一种促进人多能性干细胞向心肌细胞分化的方法，其特征在于，该方法包括至少四个阶段：诱导分化前阶段：用TeSR-E8、mTeSR1或E8培养基中的一种或多种传代培养人多能性干细胞，培养2-5天，至细胞密度为80％-100％；其中包括在含有10μMY27632的TeSR-E8、mTeSR1或E8培养基中培养1天；第一诱导分化阶段：用第一诱导分化培养基诱导分化培养2天；第二诱导分化阶段：用第二诱导分化培养基诱导分化培养2天；第三诱导分化阶段：用第三诱导分化培养基诱导分化培养5-10天；所述第一诱导分化培养基由基础培养基、叶酸、其他诱导分化组分和小分子化合物A；所述第二诱导分化培养基由基础培养基、叶酸、其他诱导分化组分和小分子化合物B；所述第三诱导分化培养基由基础培养基、叶酸和其他诱导分化组分；其中，所述叶酸的浓度为1μM～3μM；所述其他诱导分化组分由转铁蛋白、L-抗坏血酸、亚硒酸钠、乙醇胺、L-肉毒碱、腐胺、亚油酸和生物素组成；所述转铁蛋白的浓度为10ngmL～30ngmL，所述L-抗坏血酸的浓度为100μgmL～500μgmL，所述亚硒酸钠的浓度为10ngmL～20ngmL，所述乙醇胺的浓度为1μgmL～3μgmL，所述L-肉毒碱的浓度为1μgmL～5μgmL，所述腐胺的浓度为10ngmL～20ngmL，所述亚油酸的浓度为0.5μgmL～2μgmL，所述生物素的浓度为0.1μgml～0.5μgml；所述小分子化合物A为CHIR99021，所述CHIR99021的浓度为1μM～10μM；所述小分子化合物B为IWP2，所述IWP2的浓度为1μM～10μM。

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