申请/专利权人：中国医学科学院北京协和医院

申请日：2024-03-13

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866884A

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077;C12N5/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开一种糖原累积症IIIa型心肌细胞模型的构建方法，涉及细胞模型构建技术领域。本发明从糖原累积症IIIa型患者外周血分离得到单个核细胞，然后重编程所述单个核细胞，生成诱导性多能干细胞，再利用多能干细胞稳定株诱导分化为心肌细胞，从而构建得到糖原累积症IIIa型心肌细胞模型，该细胞模型能够准确反映糖原累积症IIIa型心肌细胞的特性，为糖原累积症IIIa型心肌病的发病机制研究和药物筛选提供稀有的细胞来源。

主权项：1.一种糖原累积症IIIa型心肌细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、从糖原累积症IIIa型患者外周血分离得到单个核细胞；S20、将所述单个核细胞培养3~4天后，进行重编程操作，得到iPSC单克隆细胞；S30、将所述iPSC单克隆细胞接种至基质胶预处理后的孔板内，用干细胞维持培养基每天换液培养，直至细胞汇合度达到75~85%，得到原代细胞；S40、将所述原代细胞使用含有ROCK抑制剂的StemFlex培养基传代培养20~40代，得到iPSC的单细胞层；S50、将所述iPSC的单细胞层进行扩板培养，然后用StemFlex培养基继续培养，每24h换液一次，直至iPSC细胞汇合度达到95%以上，得到iPSC稳定细胞株；S60、将所述iPSC稳定细胞株进行诱导分化，观察分化得到的细胞，并进行免疫荧光检测、流式检测、动作电位检测和糖原检测，以判断心肌细胞模型是否构建成功。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医学科学院北京协和医院 一种糖原累积症IIIa型心肌细胞模型的构建方法

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