申请/专利权人：东曜药业有限公司

申请日：2019-10-18

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN112680396B

主分类号：C12N5/00

分类号：C12N5/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2021.05.21#实质审查的生效;2021.04.20#公开

摘要：本发明提供了一种单抗或重组蛋白大规模生产中细胞扩增的方法。具体而言，本发明提供了一种细胞扩增的方法，其包括：将细胞依次进行复苏、CO2摇床批式培养，之后在20L‑100L生物反应器中先进行批式培养再进行灌注培养。本发明的细胞扩增方法结合了细胞批式培养batchculture和灌注培养perfusionculture技术，只需一个较小体积的生物反应器扩增，即可满足最终大规模细胞培养的种子细胞量，大大缩短扩增时间，节约成本，减少设备占用空间，维持或者提高所产生重组蛋白或单抗的质量。

主权项：1.一种细胞扩增的方法在生产抗体或重组蛋白中的应用，其包括：将细胞依次进行复苏、CO2摇床批式培养，之后在生物反应器中先进行批式培养再进行灌注培养；所述细胞为CHO细胞；CHO细胞复苏后在摇瓶中扩增到4×109-10×109cells，接种25LWave反应器，批式培养1-2天，细胞密度达到1×106-2×106cellsmL,补充培养基至25L，批式培养3-4天，在批式培养过程中，设置培养条件：pH6.8-7.3，温度35-38℃，反应器摇摆角度3-8°，摇摆振幅10-15rpm，当细胞密度达到6×106-10×106cellsmL时开始灌注培养，设置培养条件：pH6.8-7.3，温度35-38℃，摇摆角度8-10°，摇摆振幅15-20rpm，起始灌注的体积为0.2-0.5CV，所述CV为培养体积，随着细胞密度增加，每天增加灌注的体积，直到细胞达到50×106-80×106cellsmL，获得足够的种子细胞后接种2000L反应器，最终培养体积为2000L，生物反应器为一次性生物反应器。

全文数据：

权利要求：

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