申请/专利权人：南京市疾病预防控制中心

申请日：2023-12-01

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117867153A

主分类号：C12Q1/6893

分类号：C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12Q1/6806;C12N15/63;C12N15/11;C12R1/90

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种基于Rep‑529基因片段的弓形虫DNA检测方法及其应用，所述检测方法包括：S1：获取粪便或脑脊液组织样本，对粪便或脑脊液组织样本中总DNA进行提取及纯化，同时设无菌水提取空白对照；S2：设定阴性对照组、空白对照组、检测组和阳性对照组；S3：将阴性对照组、空白对照组、检测组和阳性对照组63‑65℃反应30min；S4：阳性对照在5‑10min出现“S”扩增曲线，阴性对照和空白对照无“S”扩增曲线，表明实验成立。本发明能够基于临床样本直接进行寄生虫DNA分子检测，扩增速度快，且添加了荧光物质能够进行实时监控；同时灵敏度高，检出限低。

主权项：1.一种基于Rep-529基因片段的弓形虫DNA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：获取粪便或脑脊液组织样本，对粪便或脑脊液组织样本总DNA进行提取及纯化；同时设无菌水提取空白对照；S2：构建LAMP反应体系总体系25μL。设定阳性对照组、空白对照组、检测组和阴性对照组，每个组中均加入15μL等温Mastermix和5μLLAMP引物混合液，阳性对照组、空白对照组、检测组和阴性对照组分别加入5μLRep-529重组质粒DNA、步骤S1得到的空白对照、步骤S1得到的DNA、无酶水；加样顺序为先加阴性对照、空白对照、检测组，最后加阳性对照。S3：将所述阳性对照组、空白对照组、检测组和阴性对照组置于63-65℃反应30min，荧光通道FAM收集实时荧光；S4：质控对照设置DNA提取空白对照为无菌水对照，与样本同时提取DNA；扩增对照以Rep-529重组质粒作为阳性对照，以无酶水作阴性对照；S5：结果判断阳性对照在5-10min出现“S”扩增曲线，阴性对照和空白对照无“S”扩增曲线，表明实验成立；样本检测有“S”扩增曲线为检测到弓形虫DNA，样本检测无“S”扩增曲线为未检测到弓形虫DNA。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京市疾病预防控制中心 一种基于Rep-529基因片段的弓形虫DNA检测方法及其应用

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