申请/专利权人：内蒙古康恩贝药业有限公司

申请日：2021-01-20

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN114858959B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88;G01N30/34

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.08.23#实质审查的生效;2022.08.05#公开

摘要：本发明提供一种大鼠血浆中麝香通心滴丸蟾蜍二烯内酯成分的检测方法及其用途，具体采用超高效液相色谱‑串联质谱UPLC‑MSMS对大鼠血浆中沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒精、蟾毒灵和酯蟾毒配基进行定性和定量检测，具体步骤为灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆加内标物，经甲醇蛋白沉淀；通过UPLC‑MSMS进行检测。其中蟾毒灵检出限为1.00ngmL，定量限为3.00ngmL；沙蟾毒精、远华蟾毒精和酯蟾毒配基检出限为2.00ngmL，定量限为6.00ngmL；去乙酰华蟾毒精检出限为3.00ngmL，定量限为9.00ngmL。本方法可在15min完成检测，通过MRM色谱图的保留时间、峰面积比值，结合标准曲线完成定量计算，操作更便捷，减少了血浆中内源性物质干扰，可用于麝香通心滴丸的药代动力学研究。

主权项：1.一种大鼠血浆中麝香通心滴丸蟾蜍二烯内酯成分的检测方法，其特征在于，所述方法采用超高效液相色谱-串联质谱对大鼠血浆中蟾蜍二烯内酯成分进行检测，所述蟾蜍二烯内酯成分包括沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒精、蟾毒灵和酯蟾毒配基，所述方法包括以下步骤：1血浆测试样品处理：取灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆，加入内标物混匀，加入甲醇，涡旋，离心；取上清液，氮气吹干，加入甲醇复溶，涡旋，离心，取上清液过滤膜，制得血浆测试样品；所述内标物为替硝唑溶液；2标准曲线制备：在空白大鼠血浆中加入蟾蜍二烯内酯成分标准品，制成系列标准曲线样品；采用步骤1的方法，将标准曲线样品代替灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆，制备得到标准曲线血浆样品；将标准曲线血浆样品注入超高效液相色谱—串联质谱仪进行分析；以蟾蜍二烯内酯成分的浓度为横坐标，蟾蜍二烯内酯成分与内标物的峰面积比值为纵坐标，进行回归，得到标准曲线；液相色谱条件为：色谱柱：AcquityBEHC18，规格为100mm×2.1mm，填料粒径为1.7μm；柱温：30～40℃；进样量：5～10μL；流速：0.25～0.35mLmin；流动相A为1～3mmolL乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序为： 时间min 流动相A％ 0→6 80→75～72 6→13 75～72→48～50 13→13.1 48～50→5 13.1→15 5 或 时间min 流动相A％ 0→6 80→78 6→10 78→53 10→13.1 53→5 13.1→15 5 质谱条件：大气压电喷雾离子源，正离子化模式；离子源接口温度290～310℃；脱溶剂管温度245～255℃；加热模块温度390～410℃；加热气流速8～12Lmin；雾化气流速2～3Lmin；干燥气流速8～12Lmin；监测模式MRM，监测扫描方式如下： 序号 化合物 母离子mz 子离子mz Q1PreBiasV 碰撞能量V Q3PreBiaV 1 沙蟾毒精 417.23 399.22 -24～-18 -31～-25 -31～-25 2 远华蟾毒精 403.25 253.19 -24～-18 -31～-25 -29～-23 3 去乙酰华蟾毒精 401.23 365.21 -24～-18 -23～-17 -28～-22 4 蟾毒灵 387.25 255.21 -18～-14 -28～-22 -30～-24 5 酯蟾毒配基 385.24 253.19 -20～-14 -24～-18 -30～-24 6 替硝唑 247.95 121.05 -16～-10 -20～-14 -15～-9 3含量测定：将步骤1制得的血浆测试样品采用步骤2的超高效液相色谱—串联质谱法进行检测，得到蟾蜍二烯内酯成分与内标物峰面积的比值，将所述比值代入步骤2中拟合的标准曲线进行计算，即可得到血浆测试样品中蟾蜍二烯内酯成分的浓度。

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