申请/专利权人：中国科学院遗传与发育生物学研究所

申请日：2022-09-30

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN116064506B

主分类号：C12N15/11

分类号：C12N15/11;C12N15/12;C12N15/10;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/64

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2023.05.23#实质审查的生效;2023.05.05#公开

摘要：本发明提供了一种绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对、sg序列和应用，涉及基因工程技术领域。本发明所述扩增引物对，可特异性扩增绵羊DQB基因的1号外显子区域，以扩增得到的该区域为靶基因，设计两对sg序列，通过引导CRISPRCas9发生基因编辑后可造成大片段缺失并导致移码突变，对DQB基因编码的蛋白质结构和功能造成较大破坏，有利于后续在体细胞或个体中进行DQB的基因编辑。在本发明实施例中，利用上述sg序列可以在湖羊胎儿成纤维细胞中实现编辑并获得基因编辑的单克隆细胞，筛选获得63个单克隆细胞株，测序后，基因编辑阳性率为66.7％，双等位基因均发生编辑的概率为28.6％。

主权项：1.一种对绵羊基因组中DQB基因1号外显子区进行基因编辑的体系，其特征在于，包括重组载体和绵羊体细胞；所述重组载体包含以绵羊DQB基因的1号外显子为靶基因设计的sg序列；所述sg序列包括两对单链寡核苷酸序列：DQBsg1-F和DQBsg1-R，及DQBsg2-F和DQBsg2-R；其中DQBsg1-F的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，DQBsg1-R的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，DQBsg2-F的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，DQBsg2-R的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对包括DQBF1和DQBR1，其中DQBF1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，DQBR1的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对、sg序列和应用

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