申请/专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司

申请日：2020-07-21

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN113956335B

主分类号：C07K14/09

分类号：C07K14/09;C12N15/70;A61K39/135;A61P31/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.02.15#实质审查的生效;2022.01.21#公开

摘要：本发明涉及一种O型口蹄疫病毒样颗粒制备方法，该方法将O型口蹄疫病毒VP0基因、VP3基因、VP1基因经重组到pETSUMO载体，与SUMO形成融合蛋白基因，扩增三个融合蛋白基因后，克隆入同一pET28a表达载体，得到重组的表达载体pET28a‑SUMO‑VP0‑SUMO‑VP3‑SUMO‑VP1，将表达载体转化到大肠杆菌中表达融合蛋白，表达的融合蛋白在10UmLUlp1蛋白酶浓度条件下，酶切去除SUMO，VP0、VP3、VP1蛋白自我组装形成O型口蹄疫病毒样颗粒。该方法高效制备O型口蹄疫病毒样颗粒，适于产业上大规模生产。

主权项：1.一种O型口蹄疫病毒样颗粒抗原制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤1将O型口蹄疫病毒VP0基因、VP3基因、VP1基因分别重组到不同的pETSUMO载体，得到重组载体，以所述重组载体为模板，分别扩增RBS-SUMO-VP0片段、T7-RBS-SUMO-VP3片段和T7-RBS-SUMO-VP1片段，所述扩增的片段分别酶切，所述酶切的片段依次克隆入同一pET28a表达载体，得到重组的表达载体pET28a-SUMO-VP0-SUMO-VP3-SUMO-VP1；步骤2将所述重组表达载体pET28a-SUMO-VP0-SUMO-VP3-SUMO-VP1转化到大肠杆菌，串联表达SUMO-VP0、SUMO-VP3和SUMO-VP1融合蛋白，纯化所述SUMO-VP0、SUMO-VP3和SUMO-VP1融合蛋白；以及步骤3将所述纯化的SUMO-VP0、SUMO-VP3和SUMO-VP1融合蛋白总蛋白浓度调节至1.0mgmL，在所述SUMO-VP0、SUMO-VP3和SUMO-VP1融合蛋白的溶液中添加10UmLUlp1蛋白酶，孵育，然后去除酶切产生的SUMO蛋白，得到自我组装的所述O型口蹄疫病毒样颗粒，其中，所述步骤1中所述O型口蹄疫病毒VP0基因如SEQIDNO.1或其简并序列所示；所述O型口蹄疫病毒VP3基因如SEQIDNO.2或其简并序列所示；以及所述O型口蹄疫病毒VP1基因如SEQIDNO.3或其简并序列所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 普莱柯生物工程股份有限公司 一种O型口蹄疫病毒样颗粒抗原制备方法、制备的O型口蹄疫病毒样颗粒抗原及其应用

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