申请/专利权人：贵州国芯生物科技有限公司

申请日：2024-01-19

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117890581A

主分类号：G01N33/558

分类号：G01N33/558;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/543

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.16#公开

摘要：本发明公开了胶体金检测领域的一种基于图像处理的胶体金检测技术方法及系统。该方法将氟唑菌酰羟胺通过戊二醛法与鸡卵清白蛋白、血蓝蛋白结合制备免疫抗原和包被抗原，免疫动物制备得到多克隆抗体，可以特异性检测氟唑菌酰羟胺的残留，且无交叉反应，检测特异性好、准确性高，可应用于食品检测、环境监测；当氟唑菌酰羟胺浓度低时，T线与C线显色程度接近，目视法往往难以判别而判别为阴性，本发明将图像处理技术应用于氟唑菌酰羟胺的胶体金检测，建立起氟唑菌酰羟胺浓度标准曲线，曲线与测量结果相关性高，能实现对氟唑菌酰羟胺的定量及微量的精确检测检测，该检测方法能减少并消除人工操作和主观判断，检测成本低、操作简单、效率高、精度高。

主权项：1.一种基于图像处理的胶体金检测技术方法，其特征在于：所述检测技术方法包括如下步骤：S1：免疫抗原的制备：称取氟唑菌酰羟胺50mg在0℃冰浴下溶解于5mLDMF中，加入28mg4-硝基苯基硼酸、85mg碳酸铯、0.01mol％四三苯基膦钯，通过柱层析纯化，得到中间体1，称取10mg所述中间体1溶于5mL去离子水中，加入20mg连二硼酸，80℃反应1h，过滤得到中间体2，称取10mg所述中间体2，加入2mL25％戊二醛去离子水溶液，4℃避光保存30min，得到溶液A，称取20mg鸡卵清白蛋白置于棕色玻璃瓶中，加入4mL碳酸钠缓冲液，得到溶液B，在避光条件下将所述溶液A加入到溶液B中，不断搅拌，得到免疫抗原氟唑菌酰羟胺-OVA，用磷酸盐缓冲液进行透析；S2：包被抗原的制备：称取20mg血蓝蛋白置于棕色玻璃瓶中，加入4mL碳酸钠缓冲液，得到溶液C，在避光条件下将所述溶液A加入到溶液C中，不断搅拌，得到包被抗原氟唑菌酰羟胺-KLH，用磷酸盐缓冲液进行透析；S3：多克隆抗体的制备：取6月龄新西兰大白兔，将所述免疫抗原与弗氏完全佐剂按体积比1：1混合后，选择颈部皮下进行多点注射，每只注射500μL，第10天进行第2次免疫注射，将所述免疫抗原与弗氏不完全佐剂按体积比1：1混合后注射，每只注射400μL，第20天进行第3次免疫，将所述免疫抗原与弗氏不完全佐剂按体积比1：1混合后注射，每只注射400μL，第30天进行第4次免疫，不加佐剂，每只注射400μL，3天后进行动脉取血，4000rmin离心5min，收集血清，得到抗氟唑菌酰羟胺血清，通过蛋白纯化柱纯化获得氟唑菌酰羟胺多克隆抗体；S4：金标记垫的制备：取1wt％的氯金酸溶液100mL，用0.1molL柠檬酸钠溶液将pH值调整至7.5，再加入5.0mg所述氟唑菌酰羟胺多克隆抗体，再加入1mL混合缓冲液，在室温下搅拌均匀后，静置30min，得到金标记溶液，将所述金标记溶液喷涂于玻璃纤维素膜上，于37℃烘干后，得到金标记垫；S5：检测卡的制备：在NC膜上划分出检测线T和质控线C，并分别在检测线T和质控线C处包被氟唑菌酰羟胺-KLH和羊抗鼠IgG抗体，在PVC底板上依次粘贴样品垫、金标记垫、NC膜、吸水纸，将检测卡室温干燥保存；S6：标准曲线的建立：配制1-40ngmL共6个浓度的氟唑菌酰羟胺标准溶液，各取10μL进行滴加，滴加3min后获取检测卡图像，对图像进处行定位、分割提取、灰度化处理、去噪处理、二值化处理，建立氟唑菌酰羟胺浓度标准曲线；S7：样品检测：取待检液10μL进行滴加，获取检测卡图像，对图像进处处理后，对检测结果进行判读，将检测结果与标准曲线对照得到所述待检液中氟唑菌酰羟胺浓度。

全文数据：

权利要求：

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