申请/专利权人：张高华奥生命科学(上海)有限公司

申请日：2020-03-13

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN111454878B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N7/00;C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2020.08.21#实质审查的生效;2020.07.28#公开

摘要：本发明公开了一种类器官病毒感染模型的构建方法和应用。所述类器官病毒感染模型的构建方法包括以下步骤：1将3D培养的类器官与病毒感染液混合，然后平面化共孵育，完成感染过程；2感染完成后，使类器官脱离平面化状态，重新回到3D培养的状态，获得分离培养的3D类器官。该模型的建立可用于抗病毒药物的高通量筛选和药物研发，以及用于病毒性疾病致病机理和对自然发生或实验引起病毒感染的防御机理的研究，为病毒感染患者的临床治疗提供了新的策略。

主权项：1.类器官病毒感染模型的构建方法，其中，所述构建方法包括以下步骤：1将获得的3D培养的类器官与病毒感染液均匀混合，然后在铺有Matrigel基质胶或BME基质胶的平板孔板上与病毒平面化共孵育，完成感染过程，其中，所述的平面化共孵育是指类器官与病毒混合后，在没有基质胶的包裹情况下，2D培养的状态；2感染完成后，在类器官培养用的培养基中使类器官脱离平面化状态，重新回到3D培养的状态，获得分离培养的3D类器官，其中，所述脱离平面化状态是指2D培养的类器官经收集，重新包裹于基质胶中，进行3D培养；3经过3D培养后，将步骤2病毒感染后的获得的分离培养的3D类器官经过破碎细胞，收集病毒，检测病毒；4将步骤2获得的分离培养的3D类器官进行抗病毒药物的药敏实验；所述类器官为人肺类器官、人肝脏类器官、人肠道类器官；其中，人肺类器官培养用的培养基的组分为：AdvancedDMEMF12；2％（体积百分比）的B-27；5％体积百分比的FBS；25ngmL的mEGF；100ngmL的hFgf7；100ngmL的mNoggin；1μM的Jagged-1肽；10μM的SB431542；3μM的CHIR99021；5μM的Blebbistatin；青霉素链霉素溶液，所述青霉素浓度为100UmL，链霉素浓度为100μgmL；其中，人肝脏类器官培养用的培养基的组分为：AdvancedDMEMF12；2％体积百分比的B-27；1mM的N-乙酰半胱氨酸；10mM的烟酰胺；500ngmL的R-Spondin1；200ngmL的EGF；100ngmL的FGF10；25ngmL的HGF；10nM的胃泌素；10μM的Forskolin；5μM的A83-01；青霉素链霉素溶液，所述青霉素浓度为100UmL，链霉素浓度为100μgmL；其中，人肠道类器官培养用的培养基的组分为：AdvancedDMEMF12；2％体积百分比的B-27；500ngmL的R-Spondin1；200ngmL的EGF；100ngmL的mNoggin；青霉素链霉素溶液，所述青霉素浓度为100UmL，链霉素浓度为100μgmL。

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权利要求：

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