申请/专利权人：宁波海尔施基因科技股份有限公司;宁波市妇女儿童医院

申请日：2020-04-02

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN113493856B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.03.11#著录事项变更;2021.10.29#实质审查的生效;2021.10.12#公开

摘要：本发明公开了一种用于冠状病毒检测并分型的多重RT‑PCR试剂盒、使用方法及其专用的引物组，该试剂盒采用单管多重反转录PCR结合毛细电泳片段分析方法针对人呼吸道样本检测并区分人易感冠状病毒，包括2019新型冠状病毒SARS‑CoV‑2、人冠状病毒229EHCoV‑229E、人冠状病毒NL63HCoV‑NL63、人冠状病毒HKU1HCoV‑HKU1、人冠状病毒OC43HCoV‑OC43、严重急性呼吸综合征冠状病毒SARS‑CoV和中东呼吸综合征冠状病毒MERS‑CoV。本发明的冠状病毒分型检测试剂盒检测周期短、灵敏度高、分型效果好，能通过对人内参B2M基因的监测实现对样本提取和扩增过程的质量监控，并利用dUTP‑UNG酶防污染体系降低由气溶胶污染而导致的假阳性结果出现。

主权项：1.一种用于冠状病毒检测分型的引物组，其特征在于，所述引物组包括用于扩增SARS-CoV-2S基因和ORF1ab基因、HCoV-NL63ORF1ab基因、SARS-CoVORF1ab基因、HCoV-HKU1ORF1ab基因、HCoV-229EORF1ab基因、MERS-CoVORF1ab基因、HCoV-OC43ORF1ab基因和人内参基因B2M的引物；所述用于扩增SARS-CoV-2S基因的正向引物序列为5’-CGGCCTTACTGTTTTGCCAC-3’，如SEQIDNO:1所示，反向引物序列为5’-CTGCACCAAAGGTCCAACCA-3’，如SEQIDNO:2所示；所述用于扩增SARS-CoV-2ORF1ab基因的正向引物序列为5’-AGTGGGGGACAACCAATCAC-3’，如SEQIDNO:3所示，反向引物序列为5’-ACAGACAACACGATGCACCA-3’，如SEQIDNO:4所示；所述用于扩增HCoV-NL63ORF1ab基因的正向引物序列为5’-GCAACGTTCTGTCGTTGTGG-3’，如SEQIDNO:5所示，反向引物序列为5’-CCTGAAAACCTTGTGCAGCG-3’，如SEQIDNO:6所示；所述用于扩增SARS-CoVORF1ab基因的正向引物序列为5’-CAGTCTTGCAGGCTGTAGGT-3’，如SEQIDNO:7所示，反向引物序列为5’-ACATCACAACCTGGGGCATT-3’，如SEQIDNO:8所示；所述用于扩增HCoV-HKU1ORF1ab基因的正向引物序列为5’-GCTAATGGTGGTACTGGTTTTTGT-3’，如SEQIDNO:9所示，反向引物序列为5’-ACACGCTGTCCATCTCTATCAT-3’，如SEQIDNO:10所示；所述用于扩增HCoV-229EORF1ab基因的正向引物序列为5’-TGTTGACAAATGGGATGATTTTTGC-3’，如SEQIDNO:11所示，反向引物序列为5’-TCAACGACTTAAGCCAGTCTCT-3’，如SEQIDNO:12所示；所述用于扩增MERS-CoVORF1ab基因的正向引物序列为5’-GGAGGTACCAGTAGCGGAGA-3’，如SEQIDNO:13所示，反向引物序列为5’-AGCAAACGACACCGTCATCA-3’，如SEQIDNO:14所示；所述用于扩增HCoV-OC43ORF1ab基因的正向引物序列为5’-TGTTGTTGGACCTGATGCGA-3’，如SEQIDNO:15所示，反向引物序列为5’-TTAAAGGAAAGACGCGCTGC-3’，如SEQIDNO:16所示；所述用于扩增人内参B2M基因的正向引物序列为5’-CCTGGAGGCTATCCAGCGTA-3’，如SEQIDNO:17所示，反向引物序列为5’-TGCTTACATGTCTCGATCCCA-3’，如SEQIDNO:18所示；所述用于扩增SARS-CoV-2S基因的正向引物，如SEQIDNO:1所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增SARS-CoV-2ORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:3所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增HCoV-NL63ORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:5所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增SARS-CoVORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:7所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增HCoV-HKU1ORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:9所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增HCoV-229EORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:11所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增MERS-CoVORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:13所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于扩增HCoV-OC43ORF1ab基因的正向引物，如SEQIDNO:15所示的5’端添加荧光报告基团FAM；所述用于检测人内参B2M基因的正向引物，如SEQIDNO:17所示的5’端添加荧光报告基团FAM。

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