申请/专利权人：无锡市人民医院

申请日：2023-04-25

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN116426617B

主分类号：C12Q1/6858

分类号：C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2023.08.01#实质审查的生效;2023.07.14#公开

摘要：本发明属于生物医药及基因检测技术领域，具体涉及一种基于发卡结构和酶切机制的高灵敏突变检测体系和应用。本发明以所述突变富集检测体系进行荧光定量PCR，可以实现稀有基因突变的富集，实现对突变模板占比为万分之一及以上的稀有基因突变的选择性高效扩增。同时，本发明不需要特殊反应试剂和碱基特殊修饰，成本低；不需要特殊的反应程序，操作简单。

主权项：1.一种非疾病诊断的基因突变富集检测方法，其特征在于，包括如下步骤：以检测EGFR基因的T790M突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针对待测样本的DNA进行荧光定量PCR扩增检测；其中，所述荧光定量PCR扩增检测的反应体系体积为30μL，含有2mMMgCl2，0.2mMdNTPs，野生特异性封阻引物0.2μM，突变特异性引物0.03μM，通用型荧光探针0.07μM，0.03UμL热启动聚合酶，以及模板DNA10μL；所述荧光定量PCR扩增检测的反应程序为：95℃3min；再95℃10s，56℃30s，55个循环；或者，以检测BRAF基因的V600E突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针对待测样本的DNA进行荧光定量PCR扩增检测；其中，所述荧光定量PCR扩增检测的反应体系体积为30μL，含有2mMMgCl2，0.2mMdNTPs，野生特异性封阻引物0.2μM，突变特异性引物0.2μM，通用型荧光探针0.05μM，0.03UμL热启动聚合酶，以及模板DNA10μL；所述荧光定量PCR扩增检测的反应程序为：95℃3min；再95℃10s，56℃30s，55个循环；或者，以检测BRAF基因的V600E突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针，和检测EGFR基因的L858R突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针对待测样本的DNA进行荧光定量PCR扩增检测；其中，所述荧光定量PCR扩增检测的反应体系体积为30μL，含有2.5mMMgCl2，0.2mMdNTPs，BRAFV600E的野生特异性封阻引物0.2μM，BRAFV600E的突变特异性引物0.2μM，BRAFV600E的通用型荧光探针0.05μM，EGFRL858R的野生特异性封阻引物0.2μM，EGFRL858R的突变特异性引物0.2μM，EGFRL858R的通用型荧光探针0.05μM，0.03UμL热启动聚合酶，以及模板DNA10μL；所述荧光定量PCR扩增检测的反应程序为：95℃3min；再95℃10s，56℃30s，55个循环；所述检测EGFR基因的T790M突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1-SEQIDNO.3所示；所述检测BRAF基因的V600E突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针的核苷酸序列分别如SEQIDNO.4-SEQIDNO.6所示；所述检测EGFR基因的L858R突变的野生特异性封阻引物、突变特异性引物以及通用发光探针的核苷酸序列分别如SEQIDNO.7-SEQIDNO.9所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 无锡市人民医院 一种基于发卡结构和酶切机制的高灵敏突变检测体系和应用

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