申请/专利权人：华南师范大学

申请日：2024-01-17

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117904262A

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;G01N33/543

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本发明提供一种基于CRISPRCas蛋白的核酸检测方法和基因检测试剂盒及其应用，核酸检测方法包括：根据目的序列设计引物，并以待测物的基因组DNA或RNA为模板进行扩增，得到待检测序列的扩增片段序列；制备信号探针：信号探针包括标记探针及与标记探针连接的标记物，其中标记探针为核酸分子，标记探针的3’端为互补配对序列，互补配对序列用于与待杂交粘性末端互补配对，待杂交粘性末端为待检测序列的扩增片段序列被Cas12蛋白切割后掉落的带有粘性末端的PAM远端序列片段；制备测试体系，并进行样品的检测。本发明通过Cas蛋白crRNA复合体与目的序列的特异性切割反应产生待杂交粘性末端并与信号探针结合，在检测位点上检测信号探针的信号，提高检测的特异性和准确性。

主权项：1.一种基于CRISPRCas蛋白的核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：根据目的序列设计引物，并以待检测序列的基因组DNA或RNA为模板进行扩增，得到待检测序列的扩增片段序列；制备信号探针：信号探针包括标记探针及与标记探针连接的标记物，其中标记探针为核酸分子，标记探针的3’端为互补配对序列，所述互补配对序列用于与待杂交粘性末端互补配对，其中待杂交粘性末端为待检测序列的扩增片段序列被Cas蛋白切割后掉落的带有粘性末端的PAM远端序列片段；制备测试体系，并进行样品的检测：将Cas蛋白和crRNA混合形成Cas蛋白crRNA复合体，将Cas蛋白crRNA复合体与待检测序列的扩增片段序列混合；其中Cas蛋白可顺式切割目的序列产生待杂交粘性末端；若待检测序列中存在目的序列，则Cas蛋白crRNA复合体可与待检测序列的扩增片段序列发生特异性切割反应，并与待检测序列的扩增片段序列结合形成Cas蛋白crRNA待检测序列复合物，将Cas蛋白crRNA待检测序列复合物体系作为测试体系，其中，所述Cas蛋白crRNA待检测序列复合物体系包括Cas蛋白crRNA待检测序列复合物和待杂交粘性末端，待杂交粘性末端为待检测序列的扩增片段序列被Cas蛋白切割后掉落的带有粘性末端的PAM远端序列片段；若待检测序列中不存在目的序列，则Cas蛋白crRNA不与待检测序列的扩增片段序列发生特异性切割反应，测试体系包括Cas蛋白crRNA和未被切割的待检测序列的扩增片段序列；将测试体系与信号探针混合，若待检测序列中存在目的序列，则信号探针可与作为测试体系的Cas蛋白crRNA待检测序列复合物体系中的待杂交粘性末端结合；若待检测序列中不存在目的序列，则信号探针没有与测试体系发生反应；在检测载体中进行检测，检测载体上设有用于捕获待杂交粘性末端的检测位点，在所述检测位点上检测是否获取信号探针的信号，若检测到信号探针的信号，则待检测序列中含有目的序列，否则待检测序列中不含目的序列。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南师范大学 基于CRISPR/Cas12顺式切割的核酸检测方法、试纸条、试剂盒及应用

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