申请/专利权人：浙江大学医学院附属妇产科医院

申请日：2022-06-24

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114934068B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/53;C12N15/113;C12N5/10;C12N15/66;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.09.09#实质审查的生效;2022.08.23#公开

摘要：本发明公开了一种ALKBH5基因稳定敲除的小鼠卵巢颗粒细胞株及构建方法和应用。本发明利用CRISPRCas9相关技术，经过sgRNA的设计、插入片段的合成及酶切处理，构建出用于敲除ALKBH5的重组质粒，通过脂质体瞬转的方法，将质粒转到入小鼠卵巢颗粒细胞mGC中，经过嘌呤霉素稳转筛选以及单克隆的挑选及验证，从而建立了ALKBH5基因稳定敲除的细胞株ΔALKBH5‑mGC。本发明的细胞株可为研究ALKBH5对多囊卵巢综合症的致病机制的进一步深入研究搭建一个良好的基础。

主权项：1.一种ALKBH5基因稳定敲除的小鼠卵巢颗粒细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1设计一对互补的靶向小鼠ALKBH5基因第一外显子的sgRNA，以PX459V2.0质粒为载体，构建出一个重组质粒，所述sgRNA的序列包括如SEQIDNO.1所示的正向引物ALKBH5-sgRNAF序列，和如SEQIDNO.2所示的反向引物ALKBH5-sgRNAR序列；2将所述重组质粒转染进经永生化处理的小鼠卵巢颗粒细胞中，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，分离单克隆细胞进行培养，获得ALKBH5基因稳定敲除的小鼠卵巢颗粒细胞株。

全文数据：

权利要求：

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