申请/专利权人：山西中医药大学

申请日：2021-11-15

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114134112B

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783;C12N5/09;C12N5/071

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.03.22#实质审查的生效;2022.03.04#公开

摘要：本发明属于医学实验模型研究技术领域，针对“T细胞介导肝细胞损伤”的体外研究模型对自身免疫性肝炎研究的重要性，公开了一种用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法。所述试剂盒包括：Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞、HL‑7702人肝细胞、T细胞肝细胞共培养专用培养基、人CD3CD28T细胞激活剂、细胞消化液、灭菌PBS溶液。所述方法是先将T细胞和肝细胞在专用培养基内进行共培养，建立“T细胞肝细胞共培养体系”，然后通过T细胞激活物的诱导，活化T细胞，并通过T细胞表达细胞因子，引起肝细胞损伤，从而在体外部分模拟人类自身免疫性肝炎的发病过程。具有“一站式”、快捷、稳定的特点，并可以降低种属差异对后续实验结果的影响。

主权项：1.一种建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：先将T细胞和肝细胞在专用培养基内进行共培养，建立“T细胞肝细胞共培养体系”，然后通过T细胞激活物的诱导，活化T细胞，建立了用于自身免疫性肝炎体外研究的模型；具体包括以下步骤：将HL-7702人肝细胞按细胞数为5×105个孔的标准用100µL的T细胞肝细胞共培养专用培养基无菌恒温培养至贴壁；将Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞采用T细胞肝细胞共培养专用培养基无菌恒温培养至贴壁，进行常规传代、换液后，调整至5×106个mL备用；在培养至已贴壁的HL-7702人肝细胞培养孔内，吸弃原有培养基，用灭菌的质量百分比为5%的PBS溶液洗2次后，每孔加入100µL已调整细胞浓度的Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞悬液，继续共培养12h；在上述共培养体系内，按2.5μL孔的剂量加入人CD3CD28T细胞激活剂，继续培养12h，即获得自身免疫性肝炎体外研究模型；所述T细胞肝细胞共培养专用培养基由体积百分比为79%的RPMI-1640、体积百分比为20%的胎牛血清和体积百分比为1%的100UmL青链霉素双抗混合液组成，-20℃保存。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山西中医药大学 用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法

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