申请/专利权人：凭祥海关综合技术服务中心

申请日：2021-11-23

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN114199644B

主分类号：G01N1/28

分类号：G01N1/28;G01N1/30;G01N1/34;G01N1/44

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.04.05#实质审查的生效;2022.03.18#公开

摘要：本发明涉及生物玻片的制作方法技术领域，具体公开了一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法，包括：（1）样品固定；（2）样品净化；（3）样品漂洗；（4）样品染色；（5）样品清洗；（6）样品固色；（7）样品清理；（8）样品封盖。本发明采用高浓度酸性品红进行粉蚧样品的染色介质，将粉蚧样品放到装有98%的酸性品红的EP管，并放到恒温震荡仪中进行恒温震荡染色，1个小时即可完成染色，与改进前的，粉蚧样品放到凹面皿中静置8‑12小时染色相比，大大缩短了染色效率，缩短了样品的鉴定时间，实现了粉蚧鉴定时间从原来当天送样第二天出具结果报告，变成现在的早上送样，当天下午出鉴定结果的快速检测，减少的了进境果蔬的通关成本，提高果蔬的通关效率。

主权项：1.一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法，其特征在于，包括如下步骤：样品固定：挑取粉蚧样品置于预装有70%乙醇溶液的容器中杀死并浸泡固定2h以上；对于需长期保存的样品，在70%乙醇溶液中加入甘油，所述甘油的添加量与70%乙醇溶液的体积比为1-2:50；（2）样品净化：将固定好的样品置于载玻片上，在体视显微镜下观察并用毛笔轻轻去除虫体表面未溶解的蜡粉和其他杂质；接着用刀具在虫体背面头胸处纵向切一个小口；然后移入预热至90-95℃的碱性溶液中水浴5-10min；当虫体柔软时，用毛笔轻轻挤压，尽可能挤出内含物，挤压动作要轻柔，注意保持虫体的完整性；随后将虫体移至70℃的热清水中清洗去杂，直至虫体透明；（3）样品漂洗：将除杂后的样本移入装有70%乙醇溶液的凹面皿中脱水5min；轻轻挤压虫体，进一步去除碱液及其溶解的内含物；（4）样品染色：将粉蚧样品放入装有98%的酸性品红的EP管，放置到恒温震荡仪中，保持55摄氏度，同时加施震荡，保持1h即可完成染色；（5）样品清洗：将染色的样本移入装有70%乙醇溶液的凹面皿去除浮色；更换乙醇溶液清洗1-2次；（6）样品固色：将步骤（5）处理过的样本移入装有丁香油的容器中浸泡透明10min并固定颜色，再将样本移入70%乙醇溶液中清理丁香油和其他杂质；（7）样品清理：在霍氏封片液浸泡10min以上，再次清理虫体内外杂物；（8）样品封盖：取载玻片滴入适量霍氏封片液，将样本移入霍氏封片液并整姿，盖上玻片封片，即可镜检；步骤（3）中，所述70%乙醇溶液中添加冰醋酸，所述冰醋酸的添加量与70%乙醇溶液的体积比为1:5-9；步骤（4）中，所述恒温震荡仪包括机体，所述机体上设有调节显示装置和震荡装置，所述调节显示装置包括控制器和与所述控制器电连接的显示屏、总开关、加热开关、频率开关、温度调节按键、频率调节按键和时间调节按键；所述震荡装置上方固定有恒温装置，所述恒温装置包括加热装置和恒温金属槽，所述加热装置与所述控制器电连接，所述恒温金属槽设置在所述加热装置上方，所述恒温金属槽上方设置有样品固定架，所述样品固定架固定在所述震荡装置上，且样品固定架上设有与所述恒温金属槽对应的插孔；所述加热装置包括加热板、第一加热片和第二加热片，所述加热板固定在所述震荡装置上，所述加热板上方设置有所述恒温金属槽，所述第一加热片和第二加热片设置在所述加热板下方，所述加热开关包括低温加热开关和高温加热开关，所述低温加热开关控制所述第一加热片的开关，所述高温加热开关控制所述第二加热片的开关；所述震荡装置包括振荡器、震荡板和弹性片，所述振荡器设于所述机体内，所述震荡板与所述机体滑动连接、并由所述振荡器驱动来回摆动，所述加热装置设于所述震荡板上方，所述震荡板外周设有凹弧，所述弹性片设置在所述凹弧处，且弹性片的底部与所述机体固定、顶部悬空，所述振荡器启动后，所述弹性片间歇式与所述加热装置接触。

全文数据：

权利要求：

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