申请/专利权人：武汉隽秀园艺科技有限公司;唐山师范学院

申请日：2021-03-11

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN113025645B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/30

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.04.15#实质审查的生效;2021.06.25#公开

摘要：本发明公开了一种以愈伤为受体获得满天星转基因植株的方法，以满天星茎段诱导得到的愈伤组织为遗传转化受体，通过农杆菌介导的方法，经愈伤组织诱导、转化受体的继代增殖培养、遗传转化，共培养，选择增殖培养、选择萌发培养、选择成苗培养并最终得到满天星的转基因植株。本发明方法简单，培养周期较短，成功实现满天星转基因植株的培育。

主权项：1.一种以愈伤为受体获得满天星转基因植株的方法，其特征在于：以满天星的茎段为外植体诱导获得愈伤组织为遗传转化受体材料，通过农杆菌介导的方法获得满天星的转基因植株；按下述步骤进行处理：S1.愈伤组织诱导：以满天星茎段为外植体，将所述的外植体在满天星愈伤组织诱导培养基中直接诱导出满天星愈伤组织；S2.转化受体的继代增殖培养：将诱导得到的满天星愈伤组织接种到愈伤组织继代增殖培养基中，为遗传转化提供受体材料；S3.遗传转化：将继代增殖培养的满天星愈伤组织作为转化受体材料转入农杆菌制备的菌液中进行侵染；S4.然后将侵染后的满天星愈伤组织进行共培养、选择增殖培养、选择萌发培养、选择成苗培养并最终得到满天星的转基因植株；所述愈伤组织诱导培养基成分为：MS基本培养基、NAA0.3-1.0mgL、6-BA0.5-1.0mgL、蔗糖30.0gL、Agar7.5gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0；所述愈伤组织继代增殖培养基成分为：MS基本培养基、2,4-D2.0mgL、NAA0.2mgL、蔗糖30.0gL、Agar7.5gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0；所述继代增殖培养过程每4周更新一次培养基，并以在更新的愈伤继代增殖培养基中培养了2周的愈伤组织作为遗传转化的受体材料；所述遗传转化步骤侵染时间为10-15min；步骤S4培养过程为，先将侵染后的满天星愈伤组织转入共培养培养基中，在24±2℃黑暗条件下进行共培养3d，然后转入选择增殖培养基中进行选择增殖培养4周，每2周更新一次培养基，筛选得到抗性愈伤组织；再将筛选得到的抗性愈伤组织接种到选择萌发培养基中培养4周，每2周更新一次培养基，筛选得到抗性芽；然后将筛选得到的抗性芽接种到选择成苗培养基中培养4周，最终获得满天星的转基因植株；所述共培养培养基成分为：MS基本培养基，2,4-D2.0mgL，NAA0.2mgL，AS100μmolL，蔗糖30.0gL，Agar7.5gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0；所述选择增殖培养基成分为：MS基本培养基，2,4-D2.0mgL，NAA0.2mgL，Km30-50mgL，Cef300mgL，蔗糖30.0gL，Agar7.0gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0；所述选择萌发培养基成分为：MS基本培养基，NAA0.2mgL，Km20-30mgL，Cef300mgL，蔗糖20.0gL，Agar7.5gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0；所述选择成苗培养基成分为：12MS基本培养基，NAA0.5mgL，Km0-20mgL，Cef300mgL，蔗糖20.0gL，Agar7.5gL，加蒸馏水至1L，pH为6.0。

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