申请/专利权人:上海爱萨尔生物科技有限公司
申请日:2021-10-27
公开(公告)日:2024-04-30
公开(公告)号:CN113862221B
主分类号:C12N5/078
分类号:C12N5/078;C12N5/074
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2024.04.30#授权;2022.01.21#实质审查的生效;2021.12.31#公开
摘要:本发明公开了一种外周血单个核细胞PBMC培养液及培养方法。本发明的培养液包括:体积比为1:0.9‑1.3的DMEMF12培养基和血细胞培养基StemPro‑34,以及细胞生长因子、L‑抗坏血酸、β‑疏基乙醇、亚硝酸钠、乙醇胺、ROCK抑制剂、人血清白蛋白、转铁蛋白、肝素钠、AHR抑制剂、MEK抑制剂和GSK‑3抑制剂。本发明公开的培养液及培养方法大大提高了PBMC细胞体外扩增培养的效率,缩短培养时间的同时保持了其群体特性,更有利于诱导重编程为多能干细胞。
主权项:1.外周血单个核细胞(PBMC)培养液,其特征在于,所述培养液包括:基础培养基DMEMF12和血细胞培养基StemPro-34,以及细胞生长因子、L-抗坏血酸、β-疏基乙醇、亚硝酸钠、乙醇胺、ROCK抑制剂、人血清白蛋白、转铁蛋白、肝素钠和AHR抑制剂;其中,所述ROCK抑制剂为Thiazovivin,其浓度为1-10μMmL;其中,所述AHR抑制剂为SR1,其浓度为0.5-5μMmL;其中,所述的细胞生长因子包括SCF、IGF-1、FLT-3L、TPO、EPO和GM-CSF,且SCF的浓度为10-100ngmL,IGF-1的浓度为10-100ngmL,FLT-3L的浓度为10-100ngmL,TPO的浓度为10-100ngmL,EPO的浓度为10-100ngmL,GM-CSF的浓度为10-100ngmL;以及其中L-抗坏血酸浓度为100μM-1mMmL;β-疏基乙醇浓度为1-10μMmL;亚硝酸钠浓度为1-10μMmL;乙醇胺浓度为1-10μMmL;人血清白蛋白浓度为5-50gL;转铁蛋白浓度为50-500μgmL;肝素钠浓度为50-500μgmL。
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权利要求:
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