申请/专利权人：武汉百氨汇基生物技术有限公司

申请日：2021-07-30

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN113564195B

主分类号：C12N15/81

分类号：C12N15/81;C12N15/66;C12N15/55;C12N1/19;C12N9/78;C12R1/84

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2021.11.16#实质审查的生效;2021.10.29#公开

摘要：本发明涉及一种果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体、基因工程菌及构建方法和蛋白表达方法，属于蛋白表达技术领域。本发明所述果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体包括骨架载体和编码果糖胺脱糖酶的基因；所述编码果糖胺脱糖酶的基因的核苷酸如SEQIDNO.1所示。本发明所述载体有利于该酶的工业化生产，生产方法绿色，安全，环保，无污染，可控，对氨基葡萄糖的大规模制备有益，会产生较大的社会价值和经济效益。

主权项：1.基于含果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体的基因工程菌的果糖胺脱糖酶表达方法，包括以下步骤：将含果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体的基因工程菌接种到BMGY液体培养基中，进行第一振荡培养至OD600在2~6之间，离心，弃上清，得到培养菌体；用BMGY液体培养基重悬所述培养菌体，在28℃、200rmin进行第二振荡培养96h；所述第二振荡培养的期间，每12h向培养基中加100%甲醇至甲醇的终体积百分含量为0.5%~1.0%；所述含果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体的基因工程菌的宿主菌为毕赤酵母GS115；所述果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体，包括骨架载体和编码果糖胺脱糖酶的基因；所述编码果糖胺脱糖酶的基因的核苷酸如SEQIDNO.1所示；所述骨架载体为pPIC9K；所述含果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体的基因工程菌的制备方法包括如下步骤：取2~3μL浓度为5μgμL的线性化质粒与80μL毕赤酵母GS115感受态细胞混合均匀，转移至0.2cm预冷的电转杯，冰上放置5min，电压1500V，电容25μF，电阻200Ω进行电击，电击后立刻加入1mL1mo1L山梨醇复苏，30℃培养1h；将转化液离心涂布于MD平板，30℃培养3~4d。

全文数据：

权利要求：

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