申请/专利权人：南方科技大学

申请日：2021-11-15

公开（公告）日：2024-05-10

公开（公告）号：CN114235979B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.10#授权;2022.04.12#实质审查的生效;2022.03.25#公开

摘要：本发明提供了一种海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法及应用，利用离子淌度质谱技术对海洋微生物脂质分子进行分子结构性表征。本发明改良了现有脂质提取程序，使用甲基叔丁基醚取代了基于氯仿的方法。采用超高效液相色谱，减少了分析时间。数据的获取采用离子淌度质谱法，并优化了离子淌度的流程。同时，离子淌度技术还可以区分同量异序和同分异构体。本发明使用自动化的数据处理流程对离子淌度质谱数据进行深度分析，并进一步构建了脂质分子结构数据库，结合脂质分子结构数据库对色谱质谱特征进行注释，并最终达到半自动化数据处理流程。本发明有效改良了现有技术对海洋微生物所产生的有机物质进行表征的局限，容许高效率、大规模研究的可能。

主权项：1.一种海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，包括步骤：脂质提取步骤：利用甲基叔丁基醚从待测海洋微生物中提取脂质样品；数据采集步骤：利用离子淌度质谱法，采用正负离子模式，以甲醇和乙醇作为流动相，采用反相超高效液相色谱对所述脂质样品进行分析，并采集数据，所述数据采集采用数据独立采集模式；数据分析步骤：首先构建一系列的脂质分子结构，并保存为MOL文件，然后把MOL文件输入ProgenesisSDFStudio生成SFD文件，得到脂质分子结构数据库，并基于所述脂质分子结构数据库的协助，利用所采集的数据来注释所述待测海洋微生物中脂质分子的质谱特征；基于得到的化合物分子的质谱特征，利用所述脂质分子结构数据库可以得到断裂质谱数据库和离子淌度碰撞横截面积数据库；所述甲醇和乙醇都用0.1％的氨水和0.04％的甲酸改性；所述注释使用自动化数据预处理程序进行；所述数据采集步骤具体包括：色谱分离：使用配备ACEExcel2SuperC18柱的AQUITYUPLC系统，溶剂A为100%甲醇，溶剂B为100%乙醇，强力洗针剂为2-丙醇；线性梯度从100%溶剂A开始，保持4分钟后，然后在10分钟时增加到50%溶剂B，在30分钟时进一步增加到99%溶剂B，再保持4分钟，梯度在34.1分钟时返回到100%溶剂B，并重新平衡2分钟；流速为0.40mLmin，柱温保持在45℃，样品管理器温度保持在7℃；质谱分析：使用配备有电喷雾源的WatersSynaptG2-Si系统，通过MassLynx软件进行控制，数据采集采用扩展动态范围模式的HDMS或HDMSE，在分辨率模式下操作；其中，质量分析仪用碘化钠溶液进行质量校准，使用亮氨酸-脑啡肽作为锁链溶液；所述脂质样品进行分析的参数为：毛细管电压为2.8kV和2.2kV，分别为正负离子模式；样品锥为40V，源温度为120℃；锥体气体为50Lh，脱溶气体为600Lh，雾化器气体为6.5Bar；捕获器直流偏压为60V，捕获器DE出口为3V；IMS波速为500ms，波高为40V，转移波速为179ms，波高为4V；所述脂质样品在150µl甲醇中重组；注入系统的脂质样品体积为10μl；扫描时间为0.4s；从50Da到2000Da，3.5min到34min的连续过程中获取数据。

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