申请/专利权人：河北乾业生物科技有限公司

申请日：2023-08-03

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN116908354B

主分类号：G01N30/06

分类号：G01N30/06;G01N30/02;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2023.11.07#实质审查的生效;2023.10.20#公开

摘要：本发明涉及物质检测技术领域，尤其涉及一种脂肪酸衍生物及其衍生方法与一种同时检测多种脂肪酸的方法和试剂盒。本发明脂肪酸的衍生方法，包括如下步骤：1将生物样本与内标液混合，静置4～6min，得到混合液；2将所述的混合液与乙酸乙酯混合4～6min，离心，取上清液，氮气吹干，得到残余物；3向所述的残余物中加入N,N’‑羰基咪唑溶液，孵育15～20min，得到中间液；4向所述的中间液中加入4‑二甲基氨基‑苯甲胺溶液，孵育30～40min，得到脂肪酸衍生物。利用本发明的衍生方法得到的产物，用于质谱分析，可以快速、准确的同时检测出11种脂肪酸。

主权项：1.一种同时检测多种脂肪酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：利用液相色谱串联质谱法检测脂肪酸衍生物，记录脂肪酸衍生物的峰面积与内标液的峰面积，计算得出脂肪酸的峰面积和内标峰面积的比值，再将该比值代入到标准曲线中，计算得出脂肪酸的浓度；所述脂肪酸衍生物的衍生方法，包括如下步骤：1将生物样本与内标液混合，静置4～6min，得到混合液；2将所述的混合液与乙酸乙酯混合4～6min，离心，取上清液，氮气吹干，得到残余物；3向所述的残余物中加入N,N’-羰基咪唑溶液，孵育15～20min，得到中间液；4向所述的中间液中加入4-二甲基氨基-苯甲胺溶液，孵育30～40min，得到脂肪酸衍生物；所述生物样本为血清；所述内标液为脂肪酸同位素；所述脂肪酸同位素为花生四烯酸-d8、油酸-13C18、亚油酸-13C18、二十二碳六烯酸-d5、α-亚麻酸-d14、二十碳五烯酸-d5；步骤3所述孵育的温度为20～25℃；步骤4所述孵育的温度为40～50℃；液相色谱条件为：色谱柱：watersACOUITYHSST31.8μm2.1×50mm；流速：0.4～0.6mLmin；柱温：54～56℃；进样量：1～3μL；流动相A为：0.05vt％甲酸水；流动相B为：0.05vt％甲酸乙腈；洗脱梯度为：0～1.7min，10～20％流动相B；1.7～1.8min，20～60％流动相B；1.8～6.0min，60～100％流动相B；6.0～6.5min，100％流动相B；6.5～6.51min，100～10％流动相B；6.51～7.00min，10％流动相B；质谱条件如下：电喷雾电离源，正离子扫描模式；多反应监测的采集模式；电喷雾电离源参数：喷雾电压：5000～6000V；离子源温度：490～510℃；雾化气：49～51psi；辅助加热气：49～51psi；气帘气：39～41psi；所述脂肪酸包括棕榈油酸、油酸、亚油酸、二十碳五烯酸、花生烯酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、ω3-二十二碳五烯酸、ω6-二十二碳五烯酸、γ-亚麻酸和α-亚麻酸。

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