申请/专利权人：广州中医药大学(广州中医药研究院)

申请日：2022-07-04

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN115290769B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.14#授权;2022.11.22#实质审查的生效;2022.11.04#公开

摘要：本发明涉及一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，该方法由以下步骤组成：首先配制混合内标溶液、混合标准品溶液和待检测进样液，再按下述方法进行检测：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Poroshell120EC‑C18色谱柱进样，接着用由A相和B相组成的流动相以0.15～0.45mLmin的流速并按照规定的程序进行梯度洗脱，同时采用多反应监测分析，获得被检测物以及标准品的谱图；最后将被检测物以及标准品的谱图比对，确定小儿七星茶颗粒中26种有效成分及含量。本方法能同时对小儿七星茶颗粒中26种有效成分进行定性和定量检测，而且具有精密度高和重复性好的优点。

主权项：1.一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1配制混合内标溶液：分别精密称取磺胺甲恶唑900μg和氯霉素890μg，用体积浓度为的80％甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合内标溶液；2配制混合标准品溶液：分别精密称取标准品分别精密称取标准品N-乙酰多巴胺二聚体Aa880μg、N-乙酰多巴胺二聚体Ab930μg、毛钩藤碱1100μg、去氢毛钩藤碱1090μg、钩藤碱1220μg、异钩藤碱1240μg、异去氢钩藤碱1250μg、去氢钩藤碱1110μg、甘草苷1070μg、异甘草苷1140μg、甘草素1110μg、异甘草素1040μg、甘草酸1140μg、绿原酸1050μg、新绿原酸1050μg、隐绿原酸1080μg、金丝桃苷1220μg、新西兰牡荆苷1020μg、日当要黄素1070μg、芦丁1095μg、对香豆酸1300μg、咖啡酸1015μg、枸橼酸1115μg、木犀草苷1200μg、木犀草素1010μg和槲皮素1160μg，加入步骤1制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合标准品储备液；3配制待检测进样液：分别称取薏苡仁8.93g、稻芽8.93g、山楂4.46g、淡竹叶6.70g、钩藤3.35g、蝉蜕1.12g和甘草1.12g；其中薏苡仁和稻芽加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至55℃下相对密度为1.08，加入乙醇使含醇量达体积百分数45％，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏；山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕和甘草加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，滤液浓缩至适量，与所述的稠膏合并，负70～75℃减压干燥，得待检样品；取所述待检样品0.5g，加入体积浓度为80％的甲醇10mL，在20℃的条件下超声30min，冷却至室温，补足减失的体积浓度为80％的甲醇质量，离心10min，吸取上清液200μL，加入步骤1制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的定容至10mL，即得所述待检测进样液；4检测方法和条件：将待检进样液和混合标准品溶液分别按下述方法注入高效液相色谱串联质谱仪并采用HPLC-MSMS多反应监测法进行检测，获得被检测物以及标准品各化学成分的离子流谱图：其中，高效液相色谱检测的方法和色谱条件为：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Poroshell120EC-C183.0×50mm,2.7-Micron色谱柱进样，接着用由A相为0.01～0.1％甲酸水溶液和B相为乙腈组成的流动相，以0.15～0.45mLmin的流速进行正负离子梯度洗脱，其中正离子洗脱的程序如下表1所示，负离子洗脱的程序如下表2所示；表1正离子洗脱的程序 表2负离子洗脱的程序 质谱检测的方法和质谱条件为：正离子检测的毛细管电压为3300～3600V，负离子检测的毛细管电压为2800～3200V；喷嘴电压为400～550V；雾化气体、干燥气体和鞘气气体为氮气；干燥气体温度为300～400℃；雾化气体压力为30～60psi；干燥气体流速为4～6Lmin；鞘气气体温度为300～400℃；鞘气气体流速为9～13Lmin；多反应监测的方法和条件为：正负离子交替进行检测分析26种成分的含量测定，其中26种成分和2种内标及MS-MRM参数如下表3：表3 5化学成分的定性与定量测定：将获得被检测物与标准品各化学成分的离子流谱图进行比较，与混合标准品溶液各化学成分的离子流图谱中相应成分的保留时间相同的离子峰即是与该化学成分相同物质的特征峰；以标准品和内标定量离子与相应离子流峰面积的比值为纵坐标，以该标准品的浓度为横坐标绘制出线性回归曲线，得到每一标准品的标准曲线方程；然后，将待检进样液中每一待检测物和内标定量离子与相应离子流峰面积的比值分别代入相应的标准曲线方程中，即可计算出每一有效成分在待检进样液中的浓度，进而计算出所述小儿七星茶颗粒中各有效成分的含量。

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