申请/专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所;邦普种业科技有限公司

申请日：2023-04-13

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN116267733B

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;A01K61/59

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.14#授权;2023.07.11#实质审查的生效;2023.06.23#公开

摘要：本发明涉及一种凡纳滨对虾抗急性肝胰腺坏死病性状的大规模测定方法，属于对虾抗性选育领域，所述方法具体为选取不携带常见病原实验虾；将副溶血弧菌菌种活化增殖，取对数生长期菌液，分装保存，一次分装一个实验周期的使用量，放至‑80℃冷冻保存备用；将保存菌株增殖，并将饵料浸泡在菌液中，单粒毒饵载菌量在5‑9×106CFU范围区间；毒饵投喂饥饿处理12‑36h后的对虾，人工感染总菌量为1‑9×107CFU尾虾；以整体死亡率达到50％及以上为测试目标，筛选出感染弧菌总量在107CFU以上而不死亡的对虾。本发明方法消除分批活化造成菌株差异，培养出同批浓度相差不大的活菌溶液，控制毒饵的投喂量、投喂次数和毒饵载菌量，使实验对虾在一定时间段内逐渐死亡，尽量客观的呈现对虾的抗病性能。

主权项：1.一种凡纳滨对虾抗急性肝胰腺坏死病性状的大规模测定方法，其特征在于，所述方法包括对虾暂养、副溶血弧菌培养、毒饵制作、人工感染和收集数据；所述的对虾暂养：每个家系或群体随机取3-5尾虾进行病原检测，确保测试实验虾不携带病原；所述的副溶血弧菌培养：将副溶血弧菌菌种活化增殖，降低测试周期内每个批次菌浓度变化误差，取出-80℃冷冻保存菌种，接种至培养基中摇菌活化过夜，再转接到新培养基中扩大培养，检测菌种毒性质粒未丢失，取对数生长期菌液，以1:1体积比加入无菌甘油保护剂至分装保存，一次分装一个实验周期的使用量，放至-80℃冷冻保存备用；所述的毒饵制作：副溶血弧菌液体培养基中加入D-半乳糖，每100ml副溶血弧菌液体培养基中加入1gD-半乳糖，高压灭菌备用；取-80℃保存的菌种，放置于水浴锅中融化，接种量的体积比为1:200；30℃、200rpm连续摇菌培养9h；使用涂布平板法或超微量分光光度计检测菌液OD600值，控制摇菌浓度在1-5×1010CFUml，将颗粒饲料浸泡在菌液中，28℃恒温条件浸泡50min以上，单粒毒饵载菌量在5-9×106CFU；所述的人工感染：饥饿处理对虾12-36h后进行人工感染，对虾体长为3-7cm，投喂毒饵4-10粒，人工感染总菌量为1-9×107CFU尾虾；控制整体投喂毒饵的时间在0.5-1h，自首次人工感染后开始计时为测试起始时间，以整体死亡率达到50%为测试目标，筛选出感染弧菌总量在107CFU以上而不死亡的对虾。

全文数据：

权利要求：

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