申请/专利权人:南京巴傲得生物科技有限公司
申请日:2011-08-12
公开(公告)日:2013-02-13
公开(公告)号:CN102925432A
主分类号:C12N15/11(2006.01)I
分类号:C12N15/11(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C07K14/00(2006.01)I;C07K1/22(2006.01)I
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2014.06.04#授权;2013.03.20#实质审查的生效;2013.02.13#公开
摘要:本发明公开了重组抗菌肽buforin IIb的生产方法,应用重组DNA技术,构建pSUMObuforin IIb原核表达载体,再转化大肠杆菌,构建表达工程菌;工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO-buforin IIb融合蛋白;然后经细胞破碎后释放出融合蛋白,使用镍离子亲和层析纯化,纯化后的融合蛋白经SUMO酶切反应,释放出buforin IIb,经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。本发明方法在原核宿主细胞中高效表达了重组抗菌肽buforin IIb,分离纯化简单,重组蛋白纯度高,易操作,易放大,表达产物稳定性好,适于大规模工业化生产。
主权项:重组抗菌肽buforin IIb的生产方法,其特征在于,它包括如下步骤:1应用重组DNA技术,将buforin IIb基因插入pSUMO载体中,构建pSUMObuforin IIb原核表达载体;2pSUMObuforin IIb原核表达载体转化大肠杆菌,构建表达工程菌;3将步骤2得到的工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO‑buforin IIb融合蛋白;4收集步骤3诱导表达后的菌体,经细胞破碎后释放出SUMO‑buforin IIb融合蛋白,使用镍离子亲和层析纯化,得到纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白;5将纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白经酶切反应,释放出buforin IIb,经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。
全文数据:
权利要求:
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