申请/专利权人：山东省科学院生物研究所

申请日：2014-03-20

公开（公告）日：2016-08-31

公开（公告）号：CN103911411B

主分类号：C12P21/02(2006.01)I

分类号：C12P21/02(2006.01)I;C07K14/46(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I;C07K1/20(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2016.08.31#授权;2014.08.06#实质审查的生效;2014.07.09#公开

摘要：本发明提供了一种有关抗菌肽复合液的生产及纯化方法，本方法以保藏编号为CGMCC No.4588的工程菌为出发菌种，经过发酵生产和分离纯化得到天蚕素AD和BuforinⅡ的抗菌肽复合液。本发明的有益效果是，以乳糖代替常规的诱导剂IPTG，降低了生产成本；实现乳糖自诱导表达融合蛋白CAD和Buforin II，简化操作规程，提高融合蛋白CAD和Buforin II表达稳定性，避免中途添加乳糖带来的染菌风险；利用中空纤维过滤、高压匀浆和层析柱分离技术，提高了融合蛋白CAD和Buforin II的得率；得到的天蚕素AD和蛙Buforin II复合溶液对E.coli DH5α有良好的杀菌活性，并且活性较单一抗菌肽增强。

主权项：含天蚕素AD和BuforinⅡ的抗菌肽复合液的生产及纯化方法，本方法以保藏编号为CGMCC No.4588的工程菌为出发菌种，经过发酵生产和分离纯化得到天蚕素AD和BuforinⅡ的抗菌肽复合液，其特征是：所述的发酵生产包括的步骤有活化、种子培养和发酵培养，所述的分离纯化包括的步骤有发酵液浓缩、菌体收集、菌体破碎、蛋白质分离和蛋白质鉴定;所述的活化步骤使用的培养基为LB培养基；所述的种子培养步骤使用的培养基为含有终浓度为80‑120 μgmL氨苄青霉素的LB液体培养基；所述的发酵培养步骤使用的培养基为Na2HPO4 44.75 gL、KH2PO4 17 gL、NH42SO4 70 gL、MgSO4 4.9 gL、酵母粉 55 gL、80‑120 μgmL的氨苄青霉素、1‑3 gL的葡萄糖、5‑20 gL的木糖和0.1‑0.5 gL的乳糖；所述的发酵液浓缩采用陶瓷膜过滤；所述的菌体破碎使用的缓冲液为0.1%Triton X‑100，100 mM NaCl， 25 mM Tris‑HCl和0.2 M NaOH；所述的蛋白分离采用疏水柱洗脱；所述的蛋白质鉴定采用管碟法;所述的陶瓷膜过滤采用的Exekia Membralox陶瓷膜，浓缩工艺条件为恒定过滤温度25‑35℃，切向流设定为3‑7 ms，保持回流阀开放，滤出阀关闭，保持发酵液在系统内循环，待系统稳定后缓慢打开滤出阀，将初始过膜压力设定在0.5‑1.2 Bar，滤出液返回原料罐，运行15‑30 min以上，将发酵液浓缩10‑15倍，所述的疏水柱洗脱工艺为将菌体破碎液经过0.22μm的纤维素薄膜过滤后，上样到经过上样缓冲液平衡30‑60 min的HiTrap Pennyl FF的疏水柱中，所述的上样缓冲液为Na2HPO4 50mM，（NH4）2SO4  2M，然后利用上样缓冲液和50 mM的Na2HPO4溶液混合梯度洗脱，收集洗脱得到的蛋白峰，所述的管碟法为单层平板，表面涂布菌体的方法。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东省科学院生物研究所 含天蚕素AD和BuforinⅡ的抗菌肽复合液的生产及纯化方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD