申请/专利权人：河南农业大学

申请日：2019-08-01

公开（公告）日：2019-11-01

公开（公告）号：CN110393744A

主分类号：A61K36/62(20060101)

分类号：A61K36/62(20060101);A61K9/14(20060101);A61P43/00(20060101);A23K10/30(20160101);A23K20/163(20160101);A23K50/75(20160101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.11.18#发明专利申请公布后的驳回;2019.11.26#实质审查的生效;2019.11.01#公开

摘要：本发明涉及一种荷叶提取物的制备方法，其将原料荷叶碎成粉状，于温度30‑55℃、压力0.3‑0.6MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取，萃取结束获得萃取液，将萃取液回收丁烷后，所得浸膏用萃取剂萃取，萃取液回收溶剂即为荷叶提取物。本发明提供了一种包含荷叶提取物的药物粉剂，其将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:1‑3混匀，烘干、粉碎即得。经试验发现：本发明包含荷叶提取物的药物粉剂对夏季暑湿热应激造成的鸡群体温升高、采食量下降，以及生长速度缓慢和产蛋率下降具有显著的改善作用，可用作缓解鸡只暑热应激添加剂。

主权项：1.一种荷叶提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将原料荷叶碎成粉状，于温度30-55℃、压力0.3-0.6MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取，萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液回收丁烷后获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇组成的萃取剂进行二次萃取，二次萃取液回收溶剂即为荷叶提取物。

全文数据：一种荷叶提取物及其制备方法和用作缓解鸡只暑热应激添加剂的应用技术领域本发明属于药物提取技术领域，具体涉及一种荷叶提取物及其制备方法和用作缓解鸡只暑热应激添加剂的应用。背景技术暑热应激是目前养鸡业中亟需解决的季节性难题之一。由于鸡体表没有汗腺，且覆盖有丰厚的羽毛，当环境温度在27℃以下时机体主要通过传导、对流和辐射的方式进行散热；当环境温度超过28℃时鸡就开始张口喘气、通过呼吸蒸发散热；如果温度继续上升，鸡就会张开翅膀并加大喘息的频度和力度，进而引发体温调节中枢机能紊乱，导致生产性能下降、死亡率增加等严重问题。我国大多数地区进入夏季后，持续多日的高温天气，再加上降水增多、鸡舍湿度过大，造成环境气压低，如果鸡舍内饲养密度过大、通风不良，更易突然发生暑热应激。发生暑热应激后，发病鸡群普遍表现为体温升高，张口呼吸，翅膀张开，伏卧少动；饮水剧增，采食量明显下降，严重者食欲废绝；胃肠蠕动减弱，粪便稀薄，甚则排出水样稀粪；鸡群生产性能下降，肉鸡生长速度缓慢，蛋鸡产蛋量下降、蛋品质不良；如果热应激持续时间较长，鸡群体质持续下降、免疫力低下，全程发病率死亡率增加，给养殖企业和养殖户带来较大的经济损失。目前，在养鸡业生产中，对暑热应激多采用增加通风，降温降湿，降低饲养密度，日粮添加VC、VE等复合多维，补充氯化钾、碳酸氢钠等电解质的方法，具有一定的预防和治疗效果。荷叶是睡莲科植物莲的叶入药，广泛分布于我国南北各地。味苦、性平，归脾、胃、肝经。具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血等功效，用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻，血热吐衄、便血崩漏等。《本草再新》称之为“清凉解暑，止渴生津，治泻痢，解火热；《本草通玄》谓之曰“开胃消食，止血固精。1991年中华人民共和国卫生部卫监发（1991）第45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单，在食用及药用两方面均有较广泛的应用。近年来国内外学者对荷叶进行了系统研究，发现其主要含有生物碱类（荷叶碱、莲碱、O-去甲基荷叶碱等）、黄酮类（槲皮素、金丝桃苷等）、有机酸类（酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸等）、挥发油（反式石竹烯、反式异柠檬烯、环辛烯、樟脑等）及其他类成分（β-谷甾醇、鞣质、维生素C、多酚、脂质、蛋白质、抗有丝分裂碱性成分等）。大量药理学试验文献表明，荷叶黄酮类和生物碱类成分主要具有调脂减肥、抗氧化、抗衰老、抗焦虑、抑菌等多种生物活性功能。在荷叶的化学成分及生物活性功能研究上，目前多集中在黄酮类和生物碱类化合物的分离提取、结构鉴定及药理学研究等方面，而关于荷叶中挥发性油类成分的分离提取鉴定及荷叶挥发油成分的生物学活性功能等方面的研究则相对较少。尹慧晶和曾虹燕等人分别采用超临界CO2萃取和水蒸气蒸馏法对荷叶挥发油类成分进行提取，但水蒸气蒸馏法容易造成挥发油成分及热敏性成分的破坏，CO2超临界萃取法萃取压力大、收率低、成本高，均不太适合大规模生产及开发。因此急需研究开发一种既能降低萃取成本、又能减少成分流失、更加适合生产开发的提取工艺，以及荷叶挥发油类成分是否为中药荷叶发挥清热解暑、祛湿升阳药效的主要化学成分基础，基于以上两个科学问题，我们开展了与本专利内容相关的研究工作。发明内容本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种荷叶提取物及其制备方法和用作缓解鸡只暑热应激添加剂的应用。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种荷叶提取物的制备方法，其包括如下步骤：1）将原料荷叶碎成粉状，于温度30-55℃、压力0.3-0.6MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取，萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液回收丁烷后获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇组成的萃取剂进行二次萃取，二次萃取液回收溶剂即为荷叶提取物。具体的，步骤1）中，亚临界萃取1-4次，料液比为1g：6-12ml，每次萃取35-60min。具体的，步骤2）中，所述萃取剂由乙酸乙酯与酸性乙醇按体积比10-20:3混合获得；所述酸性乙醇是用95%乙醇将浓硫酸或浓盐酸稀释至质量百分浓度为0.5-2%而得。进一步优选的，步骤2）中，浸膏用萃取剂萃取2-4次，料液比为1g：8-20ml，萃取温度为30-55℃。本发明提供了采用上述方法制备得到的荷叶提取物。本发明提供了包含上述荷叶提取物的药物粉剂，其将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:1-3混匀，烘干、粉碎即得。本发明所制备的荷叶提取物（主要为挥发油）葡萄糖粉剂既可拌料饲喂，又可饮水给药，保证临床使用的便利性和添加量的可控性。本发明提供了上述荷叶提取物或药物粉剂在用作缓解鸡只暑热应激添加剂的应用。以药物粉剂为例，在每年的高温暑湿季节，或因高温高湿造成鸡群表现出食欲低下、呼吸困难、粪稀泄泻、生长缓慢、产蛋下降等暑热应激症状时，以本发明荷叶提取物葡萄糖药物粉剂按0.1-0.3%的质量添加比进行拌料使用，或按鸡只每千克体重100mg药量进行饮水给药，连用7-15天。和现有技术相比，本发明的有益效果：1）与传统水醇提取相比，采用本发明提取方法荷叶中的挥发性成分、热敏性成分不被破坏，大分子蛋白质、鞣质不被提取出来，所以该提取物中挥发油、生物碱、黄酮类活性成分含量高；2）与超临界二氧化碳提取相比，萃取压力小，提取成本低，浸膏收率高，可以大规模应用；3）经试验验证发现：本发明包含荷叶提取物的药物粉剂对夏季暑湿热应激造成的鸡群体温升高、采食量下降，以及生长速度缓慢和产蛋率下降具有显著的改善作用，可用作缓解鸡只暑热应激添加剂。具体实施方式以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。实施例1一种荷叶提取物的制备方法，其具体包括如下步骤：1）将干燥的荷叶50kg碎成粉状，于温度40℃、压力0.5MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取（亚临界萃取3次，料液比为1g：9ml，每次萃取45min），萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液减压浓缩回收丁烷后，获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇按体积比10:3组成的萃取剂进行二次萃取（二次萃取3次，料液比为1g：10ml，温度40℃，酸性乙醇是用95%乙醇将浓盐酸稀释至质量百分浓度为1%而得），二次萃取结束获得二次萃取液，二次萃取液减压浓缩回收溶剂即为荷叶提取物，1800g。一种包含上述荷叶提取物的药物粉剂，其将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:1混匀，烘干、粉碎即得。实施例2一种荷叶提取物的制备方法，其具体包括如下步骤：1）将干燥的荷叶10kg碎成粉状，于温度30℃、压力0.6MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取（亚临界萃取4次，料液比为1g：12ml，每次萃取60min），萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液减压浓缩回收丁烷后，获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇按体积比15:3组成的萃取剂进行二次萃取（二次萃取3次，料液比为1g：15ml，温度35℃，酸性乙醇是用95%乙醇将浓盐酸稀释至质量百分浓度为1%而得），二次萃取结束获得二次萃取液，二次萃取液减压浓缩回收溶剂即为荷叶提取物，308g。一种包含上述荷叶提取物的药物粉剂，其将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:3混匀，烘干、粉碎即得。实施例3一种荷叶提取物的制备方法，其具体包括如下步骤：1）将干燥的荷叶10kg碎成粉状，于温度55℃、压力0.3MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取（亚临界萃取2次，料液比为1g：6ml，每次萃取35min），萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液减压浓缩回收丁烷后，获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇按体积比20:3组成的萃取剂进行二次萃取（二次萃取2次，料液比为1g：15ml，温度55℃，酸性乙醇是用95%乙醇将浓盐酸稀释至质量百分浓度为1%而得），二次萃取结束获得二次萃取液，二次萃取液减压浓缩回收溶剂即为荷叶提取物，320g。一种包含上述荷叶提取物的药物粉剂，其将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:2混匀，烘干、粉碎即得。下述以实施例1制备包含荷叶提取物的药物粉剂为例进行相关应用试验。在下述试验中，为方便描述，统一将“包含荷叶提取物的药物粉剂”记为“荷叶药物粉剂”。应用试验1、药理学解热试验。动物分组：取200~220g的SD大鼠（购于郑州大学实验动物中心），雌雄各半，实验前，每日测量体温2次（测定肛温前让动物排空粪便），连续2日，选体温波动不超过0.5℃的大鼠105只，按性别、体重随机分为7组，每组3个重复。分别为空白对照组，LPS模型组，阿司匹林对照组（0.22gkg），双黄连对照组（1mlkg），荷叶药物粉剂的高（0.6gkg）、中（0.4gkg）、低（0.2gkg）剂量组。其中，各给药组按照实验SD大鼠体重计算出给药量后，将药物溶解于蒸馏水里制成药液，灌胃1ml只，每天给药1次，连续5天。空白对照组和LPS模型组每日灌胃等量的0.9%生理盐水。致大鼠发热法：实验前6h禁食不禁水，除空白对照组外，各组于末次给药1h后，每只大鼠一次性腹腔注射脂多糖（100ugkg）0.2ml只，随后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、5.5h、7h、9h、12h测量1次体温，连续监测12h。统计学处理：应用SPSS10.0forWindows统计分析软件进行处理，实验数据用平均值±标准差（x—±s）表示，用t检验进行两两比较，P0.05差异显著，有统计学意义。试验结果：结果见表1。表1.荷叶药物粉剂对LPS致大鼠发热的影响注释：与模型组比较，同列字母不同表示差异显著（p0.05）。由表1可以看出：注射LPS致热0.5h、1h后，各给药组大鼠体温变化不大；1h后模型组体温开始持续升高，12h后温度开始恢复正常。其中，本发明荷叶药物粉剂的高剂量、中剂量组的体温变化整体水平最低且变化平稳，与模型组比较，在不同时间点1h、1.5h、3h、4h、5.5h、7h、9h差异有统计学意义（p0.05），降温效果与阿司匹林组相近，比双黄连组好；低剂量组在1h、4h、9h时与模型组相比，有显著性差异（p0.05），降温效果不如阿司匹林组、双黄连组。应用试验2、靶动物临床试验。内毒素（LPS）人工诱导雏鸡发热模型的建立从河南农业大学种鸡场购买20日龄AA肉鸡60只，随机分为6组，每组10只，各组在试验开始前两天，每天早晚各测定一次体温，统计出基础体温。第1-5组腹腔注射内毒素（LPS），剂量分别为40、60、80、100、120ugkg；第6组翅下静脉注射生理盐水作为对照。注射内毒素后1、2、4、6、8h测定鸡直肠体温。绘制体温变化曲线。根据各组发热情况确定LPS给药剂量，建立LPS人工诱导雏鸡发热模型。试验结果见表2。表2.不同剂量LPS人工诱导建立雏鸡发热模型的体温变化注：同列数据，Δ表示与对照组比较差异显著P＜0.05.从表2可见，腹腔注射LPS后，各剂量LPS造模组鸡群从1h后均开始出现体温上升，4h—6h时各组体温达到高峰，8h时开始有所下降，但除40ugkg组外各组仍显著高于对照组。其中，100ugkg试验组体温上升最为显著，且体温变化曲线较为规律，因此选择100ugkg剂量作为LPS造模的最佳剂量。试验分组及设计从河南农业大学种鸡场购买1日龄AA肉鸡180只，饲养到20日龄，随机分6组，每组10只，设3个重复。分别为荷叶药物粉剂高、中、低剂量组和阿司匹林药物对照组、LPS发热模型对照组与健康对照组。各组先进行LPS诱导发热后，再将荷叶药物粉剂高、中、低剂量组以鸡只体重计算按200mgkg、100mgkg、50mgkg体重饮水给药，阿司匹林对照组按100mgkg体重进行饮水给药，连用2天。LPS模型组和健康对照组仅饮水不给药。各组在给药时、以及给药2h、6h、12h、24h、48h后测定直肠温度，绘制体温变化曲线。荷叶药物粉剂对人工诱导雏鸡发热模型的解热试验试验结果见表3。表3.荷叶药物粉剂对人工诱导雏鸡发热模型的解热效果注：同列数据，*表示与LPS对照组比较差异显著P＜0.05；Δ表示与健康对照组比较差异显著P＜0.05.由表3可以看出：LPS造模后，除健康对照组外，各试验组鸡只体温均超过正常体温，处于发热状态。给药12h后，荷叶药物粉剂试验药物高、中、低剂量组以及阿司匹林药物对照组体温显著低于LPS模型对照组P0.05，但仍显著高于健康对照组P0.05；给药24h后，荷叶药物粉剂试验药物高、中、低剂量组以及阿司匹林药物对照组体温显著低于LPS模型对照组P0.05，且荷叶药物粉剂试验药物高、中剂量组，药物对照组体温与健康对照组比较无显著差异P﹥0.05。结果表明，荷叶药物粉剂有良好的解热作用，高、中剂量的解热效果优于低剂量组。临床应用：2018年7月底，本发明荷叶药物粉剂在法莫特养鸡合作社兰考城郊蛋鸡养殖场进行了临床试用。选择21周龄开产早期阶段的海兰白蛋鸡舍，由于受环境高温暑湿影响，鸡群食欲不振，采食量下降，产蛋量不上升。使用本发明的荷叶提取物制备的葡萄糖粉剂，按0.2%比例拌料饲喂，连用10天，同时配合通风降温等措施，鸡群精神状态明显改善，体温恢复正常，食欲和采食量明显提升，产蛋量逐渐上升到正常水平。

权利要求：1.一种荷叶提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将原料荷叶碎成粉状，于温度30-55℃、压力0.3-0.6MPa条件下选用丁烷为萃取剂进行亚临界萃取，萃取结束获得一次萃取液，一次萃取液回收丁烷后获得浸膏；2）将浸膏再用由乙酸乙酯与酸性乙醇组成的萃取剂进行二次萃取，二次萃取液回收溶剂即为荷叶提取物。2.如权利要求1所述荷叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤1）中，亚临界萃取1-4次，料液比为1g：6-12ml，每次萃取35-60min。3.如权利要求1所述荷叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述萃取剂由乙酸乙酯与酸性乙醇按体积比10-20:3混合获得；所述酸性乙醇是用95%乙醇将浓硫酸或浓盐酸稀释至质量百分浓度为0.5-2%而得。4.如权利要求4所述荷叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，浸膏用萃取剂萃取2-4次，料液比为1g：8-20ml，萃取温度为30-55℃。5.采用权利要求1至4任一所述方法制备得到的荷叶提取物。6.一种包含权利要求3所述荷叶提取物的药物粉剂，其特征在于，将荷叶提取物与无水葡萄糖按质量比1:1-3混匀，烘干、粉碎即得。7.权利要求5所述荷叶提取物或权利要求6所述药物粉剂在用作缓解鸡只暑热应激添加剂中的应用。

百度查询： 河南农业大学 一种荷叶提取物及其制备方法和用作缓解鸡只暑热应激添加剂的应用

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