申请/专利权人：新加坡科技研究局

申请日：2015-10-27

公开（公告）日：2020-08-25

公开（公告）号：CN107405397B

主分类号：A61K39/395(20060101)

分类号：A61K39/395(20060101);C07K16/28(20060101);A61P31/00(20060101);A61P35/00(20060101);A61P37/00(20060101)

优先权：["20141027 GB 1419089.6","20141027 GB 1419092.0"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.08.25#授权;2017.12.22#实质审查的生效;2017.11.28#公开

摘要：本发明公开了抗TIM‑3抗体，以及包含该抗体的药物组合物，以及使用该抗体的用途和方法，例如治疗癌症，感染性疾病或T细胞功能障碍性疾病。本发明还公开了针对TIM‑3和其他靶标的双特异性抗体，优选实施方式是针对TIM‑3和CD3的双特异性抗体。

主权项：1.一种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包括重链可变区序列和轻链可变区序列，其特征在于，所述重链可变区序列由SEQIDNO:50或51的序列构成，和所述轻链可变区序列由SEQIDNO:45或46的序列构成。

全文数据：抗TIM-3抗体技术领域[0001]本发明涉及结合T细胞免疫球蛋白粘蛋白3TIM-3的抗体。背景技术[0002]T细胞耗竭是许多慢性感染和癌症中出现的T细胞功能障碍的状态。它通过T细胞效应子功能不良、抑制性受体的持续表达和与功能性效应子或记忆性T细胞的转录状态不同的转录状态而确定。耗竭阻碍了对感染和肿瘤的最佳控制ΦJohnWherry.,自然免疫学“NatureImmunology”12,492-4992011。[0003]T细胞耗竭的特征在于T细胞功能逐步和渐进性的丧失。在慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染期间，耗竭是明确的，并且通常在抗原续存antigenpersistence的情况下发生，其在许多慢性感染包括乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒感染）以及肿瘤转移期间都有出现。耗竭不是均匀的失能定型，因为表型和功能缺陷的等级可以表现出来，这些细胞与原型效应子、记忆和无能T细胞不同。耗竭的T细胞在高等级慢性感染期间最常出现，抗原刺激的水平和持续时间是该过程的关键决定因素（Yi等，免疫学“Immunology”2010年4月；1294:474-481。[0004]循环的人肿瘤特异性CD8+T细胞可能有细胞毒性并且在体内产生细胞因子，这表明了自身和肿瘤特异性的人CD8+T细胞在有效的免疫治疗，例如用肽接种、不完全弗氏佐剂IFA和CpG之后或过继转移后可以达到功能性能力。与外周血相比，转移的T细胞有功能缺陷，细胞因子产生异常低，抑制性受体PD-UCTLA-4和ΊΊΜ-3上调。功能缺陷是可逆的，因为从黑素瘤组织分离的T细胞可以在短期体外培养后恢复产生IFN-γ。然而，仍然要确定这种功能障碍是否涉及进一步的分子途径，可能类似于动物模型中限定的T细胞耗竭或无反应性Baitsch等人JClinInvest.2011;1216:2350-2360。[0005]程序性细胞死亡IPD-I，也称为⑶279,是人类中⑶1基因编码的I型膜蛋白。它有两个配体，PD-Ll和ro-L2。[0006]PD-I途径是T细胞衰竭的关键免疫抑制介质。阻断该途径可引起T细胞活化、扩增和效应子功能增强。因此，PD-I负调节τ细胞反应。已经将ro-i鉴定为慢性疾病状态中耗竭τ细胞的标志物，并且已经显示阻断PD-I:PD-IL的相互作用部分恢复了T细胞功能。Sakuishi等人，JEM第207卷，2010年9月27日，第2187-2194页）。[0007]纳武单抗Nivolumab，BMS-936558是2014年7月在日本批准用于治疗黑色素瘤的抗PD-I。其它抗PD-I抗体描述于WO2010077634，W02006121168中。[0008]T细胞免疫球蛋白粘蛋白3ΊΊΜ-3是被鉴定为在耗尽的CD8+T细胞上上调的免疫调节因子Sakuishi等人，JEM第207卷，2010年9月27日，第2187-2194页）。最初鉴定出ΊΊΜ-3在IFN-γ分泌Thl和Tcl细胞上选择性表达。TIM-3与其配体半乳凝素-9的相互作用触发了ΊΊΜ-3+Τ细胞的细胞死亡。抗ΊΊΜ-3抗体描述于Ngiow等人癌症研究“CancerRes2011年5月15日；7110:3540-51和US5，552，156中。[0009]ΊΊΜ-3和ro-Ι都可以作为T细胞反应的负调节因子，并且对ΊΊΜ-3和ro-Ι途径的组合靶向在控制肿瘤生长方面比单独靶向途径更有效。（Sakuishi等人，JEM第207卷，2010年9月27日，第2187-2194页；和Ngiow等人，癌症研究“CancerRes.”2011年5月15日；7110:3540-51。[0010]ΊΊΜ-3也可以在肿瘤细胞，特别是造血起源的肿瘤细胞表面表达，例如急性骨髓性白血病细胞Kikushige等人，细胞干细胞“CellStemCell”2010;3:76708-17，因此，在某些情况下，TIM-3可能是可能被特异性抗体祀向的肿瘤相关抗原。发明内容[0011]本发明涉及与TIM-3结合的抗体或抗原结合片段。还公开了重链和轻链多肽。抗体、抗原结合片段和多肽可以分离和或纯化的形式提供，并且可以配制成适合研究、治疗和诊断的组合物。[0012]在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段或多肽是细胞毒性的，例如针对表达ΊΊΜ-3的细胞，例如表达ΊΊΜ-3的T细胞或肿瘤细胞。在一些实施方式中，由于其细胞毒性作用，抗体或抗原结合片段或多肽被用于治疗癌症。适合的癌症包括白血病，例如急性骨髓性白血病。[0013]在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段或多肽可有效恢复T细胞中的T细胞功能，例如，CD8+T细胞，显示T细胞耗竭或T细胞无效能。[0014]本发明的不同方面是基于被称为△3,810,66,67和69的抗体。本发明的其它方面是基于被称为All和All_gl的抗体。[0015]A3[0016]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0018]或其变体，其中序列⑴至Vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0019]关于本发明的所有方面，在HC-CDR1:SYYMHSEQIDN0:58的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GYTFTSYYMHSEQIDN0:24内。[0020]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0024]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0026]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0027]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO1、6、7、8之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO1、6、7、8之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选具有75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0028]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO19、24或58、25、26之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO19、24或58、25、26之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0029]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl和至少一个重链可变区（Vh，轻链可变区包含SEQIDNO1、6、7、8之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO1、6、7、8之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO19、24或58、25、26之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO19、24或58、25、26之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0030]抗体可以任选结合ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述的抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0031]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0034]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：[0035]重链包含分别与GYTFTSYYMHSEQIDNO:24或SYYMHSEQIDNO:58、IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25、SPGVVTALFDYSEQIDN0:26具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和[0036]轻链包含分别与RASQDIGSYLASEQIDN0:6、AASTLQSSEQIDN0:7、QQSYSSPPTSEQID从:8具有至少85%总体序列同一性的1^001?1儿：-〇1?2儿：-〇1?3。[0037]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0038]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0039]重链序列与重链序列：SEQIDNO:19具有至少85%的序列同一性;和[0040]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:1具有至少85%的序列同一性。[0041]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0042]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区重链框架序列，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0043]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0047]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间，可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0048]BlO[0049]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0052]或其变体，其中序列⑴至Vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0053]关于本发明的所有方面，在HC-CDRl:SSDYYWGSEQIDNO:59的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GGSIGSSDYYWGSEQIDN0:27内。[0054]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0058]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0060]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0061]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO2、9、10、11之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO2、9、10、11之一或图1所示¥[链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0062]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO20、27或59、28、29之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO20、27或59、28、29之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0063]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl和至少一个重链可变区（Vh，轻链可变区包含SEQIDNO2、9、10、11之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO2、9、10、11之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO20、27或59、28、29之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO20、27或59、28、29之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0064]抗体可以任选地结合于ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0065]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0067]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括重链和轻链可变区序列，其中，[0068]重链包含分别与GGSIGSSDYYWGSEQIDN0:27或SSDYYWGSEQIDN0:59，SIYYSGSTYYNPSLKSSEQIDN0:28，GEHRGEFDYSEQIDN0:29具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl，HC-CDR2，HC-CDR3，和[0069]轻链包含分别与RASQSVGSYLASEQIDN0:9，DATNRATSEQIDN0:10,QHRRTSEQID从：11具有至少85%总体序列同一性的1^001?1儿：-〇1?2儿：-〇1?3。[0070]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0071]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0072]重链序列与重链序列：SEQIDNO:20具有至少85%的序列同一性;和[0073]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:2具有至少85%的序列同一性。[0074]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0075]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间d可变区重链框架序列，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0076]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0077]LC-CDRl:RASQSVGSYLASEQIDNO:9[0078]LC-CDR2:DATNRATSEQIDNO:10[0079]LC-CDR3:QHRRTSEQIDNO:11[0080]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0081]G6[0082]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0084]或其变体，其中序列⑴至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0085]关于本发明的所有方面，在HC-CDRl:SSNWWSSEQIDN0:60的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GGSISSSNWWSSEQIDN0:30内。[0086]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0090]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0092]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0093]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO3,12,13,14之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO3,12,13,14之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0094]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO21，30或60,31，32之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO21，30或60,31，32之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0095]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl和至少一个重链可变区（Vh，轻链可变区包含SEQIDNO3,12,13,14之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO3,12,13,14之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO21，30或60,31，32之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO21，30或60,31，32之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0096]抗体可以任选地结合于ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述的抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0097]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0099]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：[0100]重链包含分别与GGSISSSNWWSSEQIDNO:30或SSNWWSSEQIDN0:60，EIYHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:31，VVAVAGTVDYSEQIDN0:32具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl，HC-CDR2，HC-CDR3，和[0101]轻链包含分别与RSSQSLLHSNGYNYLDSEQIDN0:12、LGSNRASSEQIDN0:13、MQGTHffPPTSEQIDNO:14具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。[0102]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%,87%,88%,89%,90%,91%，92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%或100%。[0103]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0104]重链序列与重链序列：SEQIDNO:21具有至少85%的序列同一性;和[0105]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:3具有至少85%的序列同一性。[0106]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0107]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含可变区重链框架序列，在CDR之间，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0108]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0112]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0113]G7[0114]ΐ本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0116]或其变体，其中序列⑴至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0117]关于本发明的所有方面，在HC-CDRl:SYYMHSEQIDNO:58的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GYTFTSYYMHSEQIDN0:24内。[0118]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0122]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0124]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0125]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO4,15,16,17之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO4,15,16,17之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%，80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0126]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO22,24或58,25,33之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNOSEQIDNO22,24或58，25，33之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0127]抗体可以包含至少一个轻链可变区和至少一个重链可变区，轻链可变区包含SEQIDNO4,15,16,17之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一或与SEQIDN04,15，16,17之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO22,24或58,25,33之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO22,24或58,25,33之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0128]抗体可以任选结合ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述的抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0129]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0131]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：[0132]重链包含分别与GYTFTSYYMHSEQIDNO:24或SYYMHSEQIDNO:58、IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25、DQYSSGWYYYGMDVSEQIDN0:33具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl，HC-CDR2，HC-CDR3，和[0133]轻链包含分别与RASQSVSSSYLASEQIDNO:15、GASSRATSEQIDNO:16、QQYGSSPITSEQIDNO:17具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。[0134]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0135]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0136]重链序列与重链序列：SEQIDNO:22具有至少85%的序列同一性;和[0137]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:4具有至少85%的序列同一性。[0138]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0139]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区重链框架序列，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0140]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0144]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0145]G9[0146]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0148]或其变体，其中序列⑴至Vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0149]关于本发明的所有方面，在HC-CDRl:SYYMHSEQIDNO:58的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GYTFTSYYMHSEQIDN0:24内。[0150]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0154]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0156]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0157]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO5,15,16,17之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO5,15,16,17之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0158]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO23,24或58,25,34之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNOSEQIDNO23,24或58，25，34之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%,99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0159]抗体可以包含至少一个轻链可变区和至少一个重链可变区，轻链可变区包含SEQIDNO5,15,16,17之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一域与SEQIDN05,15，16,17之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO23,24或58,25,34之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO23,24或58,25,34之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0160]抗体可以任选结合ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述的抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0161]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0163]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：[0164]重链包含分别与GYTFTSYYMHSEQIDNO:24或SYYMHSEQIDNO:58，IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25，DLYSYGFYYYGMDVSEQIDN0:34具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl，HC-CDR2，HC-CDR3，和[0165]轻链包含分别与RASQSVSSSYLASEQIDNO:15、GASSRATSEQIDNO:16、QQYGSSPITSEQIDNO:17具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。[0166]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0167]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0168]重链序列与重链序列：SEQIDNO:23具有至少85%的序列同一性;和[0169]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:5具有至少85%的序列同一性。[0170]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0171]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间可变区重链框架序列，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0172]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0176]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0177]All[0178]ΐϊ:发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i至iii，或氨基酸序列iv至vi，或优选氨基酸序列i至vi:[0180]或其变体，其中序列⑴至Vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。[0181]关于本发明的所有方面，在HC-CDRl:GYYWSSEQIDNO:61的实施方式中，该序列可以包含在更大的序列GGSFSGYYWSSEQIDN0:52内。[0182]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下CDR的至少一个轻链可变区：[0186]抗体或抗原结合片段可以包含含有以下⑶R的至少一个重链可变区：[0189]抗体可以包含含有⑶R的至少一个轻链可变区，如图1或图3所示。抗体可以包含含有⑶R的至少一个重链可变区，如图2或3所示。[0190]抗体可以包含至少一个轻链可变区（Vl，其包含SEQIDNO45,46,47,48,49之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO45,46,47,48,49之一或图1所示Vl链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0191]抗体可以包含至少一个重链可变区（Vh，其包含SEQIDNO50,51，52或61，53,54之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一，或与SEQIDNO50,51，52或61，53,54之一或图2所示Vh链氨基酸序列的氨基酸序列具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列。[0192]抗体可以包含至少一个轻链可变区和至少一个重链可变区，轻链可变区包含SEQIDNO45,46,47,48,49之一的氨基酸序列，或图1所示的氨基酸序列之一或与SEQIDNO45,46,47,48,49之一或图1所示¥[链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列），重链可变区包含SEQIDNO50,51，52或61，53,54之一的氨基酸序列，或图2所示的氨基酸序列之一（或与SEQIDNO50,51，52或61，53,54之一或图2所示¥1]链氨基酸序列的氨基酸序列之一具有至少70%，更优选至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列）。[0193]抗体可以任选结合ΊΊΜ-3。抗体可以任选地具有如上所述的氨基酸序列组分。抗体可以是IgG。在一个实施方式中，提供了包含与TIM-3结合的本文所述的抗体或抗原结合片段的任选分离的体外复合物。[0194]在本发明的一个方面，提供分离的重链可变区多肽，所述重链可变区多肽包含以TCDR:[0196]在本发明的一个方面，提供抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：[0197]重链包含分别与GGSFSGYYWSSEQIDNO:52或GYYWSSEQIDNO:61，EINHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:53，GYVAGFDYSEQIDN0:54具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl，HC-CDR2，HC-CDR3，和[0198]轻链包含分别与SGSSSNIGNNYVSSEQIDN0:47,GNNWRPSSEQIDN0:48，ETWDSSLSAGVSEQIDNO:49具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。[0199]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0200]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：[0201]重链序列与重链序列：SEQIDNO:50或51具有至少85%的序列同一性;和[0202]轻链序列与轻链序列：SEQIDNO:45或46具有至少85%的序列同一性。[0203]在一些实施方式中，序列同一性程度可以是86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0204]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区重链框架序列，按照HCFRl:HC-CDRl:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0205]在本发明的一个方面，提供分离的轻链可变区多肽，任选地与本文所述的重链可变区多肽组合，所述轻链可变区多肽包含以下CDR:[0209]在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含在⑶R之间的可变区轻链框架序列，按照LCFRl:LC-CDRl:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4排列。框架序列可以源自人共识框架序列。[0210]在一些实施方式中，抗体或抗体结合片段还包含人不变区。例如，选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4之一。[0211]在一些实施方式中，抗体或抗体结合片段还包含鼠不变区。例如，选自IgGl、IgG2A、IgG2B和IgG3之一。[0212]在本发明的另一方面，提供任选分离的抗体或抗原结合片段，其能结合ΊΊΜ-3且是双特异性抗体或双特异性抗原结合片段。在一些实施方式中，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段包含如文本所述能结合TIM-3的抗原结合片段或多肽，此外包含能结合另一靶蛋白如非TIM-3的靶蛋白的抗原结合域。在一些实施方式中，靶蛋白是细胞表面受体。在一些实施方式中，靶蛋白是免疫细胞如T细胞的细胞表面上表达的细胞表面受体。在一些实施方式中，能结合另一靶蛋白的抗原结合域能够结合T细胞受体TCR复合物或其组分。在一些实施方式中，抗原结合域能够结合CD3或CD3多肽。在一些实施方式中，抗原结合域能够结合⑶S多肽CD3y，CD3S，⑶3ζ或⑶3ε的一个或多个。在一些实施方式中，双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器抗体。在一些实施方式中，靶蛋白可以是CD28家族成员。在一些实施方式中，CD28家族成员选自：PD-I，LAG3，ICOS，CTLA4，BTLA或CD28。[0213]在本发明的另一方面，提供组合物，如药物组合物或药物。组合物可以包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽和至少一种药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂或稀释剂。[0214]在本发明的另一方面，提供编码本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽的分离的核酸。核酸可以具有SEQID勵:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、55、56或57图4之一的序列或者具有退化的编码序列作为遗传密码的结果，或者可以具有与其相具有至少为70%同一性的核苷酸序列，任选75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。[0215]在本发明的一个方面，提供了包含本文所述的核酸的载体。在本发明的另一方面，提供包含载体的宿主细胞。例如，宿主细胞可以是真核生物的，或哺乳动物的，例如中国仓鼠卵巢CHO，或人类的；或可以是原核细胞，例如大肠杆菌E.coli。在本发明的一个方面，提供制备本文所述的抗体或抗原结合片段或多肽的方法，所述方法包括在适于表达编码抗体或抗原结合片段或多肽的载体的条件下培养本文所述的宿主细胞，并回收抗体或抗原结合片段或多肽。[0216]在本发明的另一方面，提供抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗或医疗方法。在本发明的另一方面，提供本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗癌症或T细胞功能障碍性疾病。在本发明的另一方面，提供了本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽在制备用于治疗癌症或T细胞功能障碍性病症的药物或药物组合物中的用途。[0217]在另一方面，提供体外或体内杀死表达TIM-3的细胞的方法，所述方法包括将如本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽施用于表达或过表达TIM-3的细胞。细胞可以是癌细胞，例如白血病或急性骨髓性白血病细胞，白细胞或T细胞。在一些实施方式中，急性骨髓性白血病细胞可以是干细胞;例如，在一些实施方式中，急性骨髓性白血病细胞可以是CD34+。[0218]在本发明的另一方面，提供增强T细胞功能的方法，其包括将本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽施用于功能失调的T细胞。该方法可以在体外或体内进行。[0219]在本发明的另一方面，提供治疗癌症或T细胞功能障碍或感染性疾病的方法，所述方法包括向患有癌症或T细胞功能障碍的患者施用本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽。[0220]在本发明的另一方面，提供了治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向患有感染性疾病的患者施用如本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽。[0221]在本发明的另一方面，提供了调节对象免疫应答的方法，所述方法包括向对象施用如本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽，以调节对象的免疫应答。[0222]在本发明的另一方面，提供了一种抑制对象中肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向对象施用治疗有效量的如本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽。[0223]在本发明的另一方面，提供了一种方法，所述方法包括将包含或疑似含有TIM-3的样品与本文所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体、或抗原结合片段与TIM-3的复合物的形成。[0224]在本发明的另一方面，提供了一种诊断对象的疾病或病症的方法，所述方法包括在体外使来自对象的样品与本文所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段和TIM-3的复合物形成。[0225]本发明的一个方面是选择患者以用ΊΊΜ3信号调节剂如抗ΊΊΜ3抗体或抗ΊΊΜ3剂进行治疗的方法，所述方法包括在体外将来自对象的样品与本文所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段和TIM-3的复合物的形成。[0226]在本发明的另一方面，提供了选择或分选对象用于TIM-3信号传导调节剂治疗的方法，所述方法包括在体外将来自对象的样品与本发明的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段和TIM-3的复合物的形成。[0227]在本发明的另一方面，提供了本文所述的抗体或抗原结合片段用于体外检测TIM-3的用途。在本发明的另一方面，提供了如本文所述的抗体或抗原结合片段作为体外诊断试剂的用途。[0228]在本发明的另一方面，提供了扩增T细胞群的方法，其中T细胞在体外或离体与本发明的抗体、抗原结合片段或多肽接触。[0229]在本发明的另一方面，提供了治疗患有T细胞功能障碍病症的对象的方法，所述方法包括在本发明抗体、抗原结合片段或多肽存在下培养由对象血液样品获得的T细胞，以扩增T细胞群、收集扩增的T细胞并将扩增的T细胞施用于需要治疗的对象。[0230]在本发明的方法中，可以提供抗体、抗原结合片段或多肽作为本文所述的组合物。[0231]在一些实施方式中，抗体可以是克隆A3、B10、G6、G7、G9、AllSAll_gl2—。[0232]发明详述[0233][0234]本发明的抗体优选结合于ΊΊΜ_3抗原），优选人或恒河猴ΊΊΜ-3,任选地以0.1至2ηΜ的Kd结合。[0235]在本发明的任何方面，抗体优选特异性结合ΤΙΜ-3例如人或恒河猴）。[0236]本发明的抗体可以以分离的形式提供。[0237]本发明的抗体可以显示出以下性质中的至少一种：[0238]a以ΙμΜ或更低，优选彡ΙμΜ、彡ΙΟΟηΜ、彡ΙΟηΜ、彡InM或彡IOOpM的Kd结合人ΊΊΜ-3；[0239]b对表达ΊΊΜ-3的细胞具有细胞毒性抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，ADCC，如表达ΊΊΜ-3的急性骨髓性白血病细胞；[0240]c增进混合淋巴细胞反应（MLR测定中的T细胞增殖（例如参见Bromelow等人J·TmmunolMethods，2001·1·1;2471-2:1-8;[0241]d增进MLR测定中的干扰素-γ产生;或[0242]e增进MLR测定中白介素-2IL-2分泌。[0243]“抗体”，包括其片段或衍生物，或合成抗体或合成抗体片段。[0244]鉴于单克隆抗体技术相关的目前技术，可以制备出大多数抗原的抗体。抗原结合部分可以是抗体例如Fab片段或合成抗体片段例如单链Fv片段[ScFv]的一部分。针对所选抗原的合适的单克隆抗体可以通过已知技术制备，例如在“单克隆抗体：技术手册MonoclonalAntibodies:Amanualoftechniques”，HZolaCRC出版社，1988和“单克隆杂交抗体：技术和应用（MonoclonalHybridomaAntibodies:TechniquesandApplications”，JGRHurrellCRC出版社，1982中描述的那些。Neuberger等人（1988，8thInternationalBiotechnologySymposium部分2,792-799讨论了嵌合抗体。[0245]单克隆抗体mAb可用于本发明的方法，并且是特异性靶向抗原上单个表位的抗体的均质群体。[0246]多克隆抗体可用于本发明的方法。单特异性多克隆抗体是优选的。可以使用本领域熟知的方法制备合适的多克隆抗体。[0247]抗体的抗原结合片段，例如Fab和Fab2片段也可以与遗传工程改造的抗体和抗体片段一起使用提供。抗体的可变重Vh和可变轻Vl结构域参与抗原识别，这一事实首先通过早期蛋白酶消化实验来识别。通过啮齿动物抗体的“人源化”进一步确认。啮齿动物来源的可变结构域可以融合到人源的恒定结构域，使得所得抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性Morrison等（1984Proc·Natl·Acad·Sci·USA81，6851-6855。[0248]该抗原特异性由可变结构域赋予并且独立于恒定结构域，这是从涉及抗体片段的细菌表达实验中得知的，所述抗体片段全部含有一个或多个可变结构域。这些分子包括Fab样分子（Better等人（1988科学（Science240，1041、Fv分子（Skerra等人（1988科学Science240,1038、单链FvScFv分子，其中Vh和Vl配对域通过柔性寡肽连接Bird等人1988Science242，423;Huston等（1988Proc·Natl·Acad·Sci·USA85，5879和包含分离的V结构域的单结构域抗体dAbWard等人（1989自然Nature341，544。参与合成保留其特异性结合位点的抗体片段的技术的一般综述可在Winter和MiIstein1991自然Nature349，293-299中找到。[0249]“ScFv分子”是指VH和VL配对结构域共价连接如通过柔性寡肽的分子。[0250]Fab，Fv，ScFv和dAb抗体片段都可以在大肠杆菌中表达和分泌，从而允许容易地产生大量的所述片段。[0251]全抗体和Fab’）2片段是“二价的”。“二价的”是指所述抗体和Fab’）2片段具有两个抗原结合位点。相比之下，Fab、Fv、ScFv和dAb片段是单价的，仅具有一个抗原结合位点。与ΊΊΜ-3结合的合成抗体也可以使用本领域熟知的噬菌体展示技术来制备。[0252]本发明的方面包括双特异性抗体，例如，由两种不同抗体的两个不同片段组成，使得双特异性抗体结合两种类型的抗原。抗原之一是TIM-3,双特异性抗体包含与TIM-3结合的本文所述的片段。抗体可以含有对第二抗原具有亲和力的不同片段，其可以是任何所需的抗原，例如已经用于癌症免疫治疗以结合细胞毒性细胞的CD3,募集并将其靶向于肿瘤部位。用于制备双特异性抗体的技术是本领域公知的，例如，参见Mueller，D等人2010生物药物（Biodrugs242:89-98，Wozniak_KnoppG等，（2010蛋白质工程设计（ProteinEngDes23⑷：289-297^361^46,PA等人，（2009癌症研究（CancerRes6912:4941-4944。[0253]因此，本发明提供能够与ΊΊΜ-3结合并且是双特异性抗体或双特异性抗原结合片段的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，可以分离双特异性抗体或双特异性抗原结合片段。[0254]在一些实施方式中，双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含根据本发明的抗原结合片段或多肽。在一些实施方式中，双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含能够结合TIM-3的抗原结合结构域，其中能够结合TIM-3的抗原结合结构域包含或由本发明的抗原结合片段或多肽构成。[0255]在一些实施方式中，双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含能够结合TIM-3的抗原结合结构域和能够结合另一靶蛋白的抗原结合结构域。[0256]能够结合另一个靶蛋白的抗原结合结构域能够结合TIM-3以外的另一蛋白质。在一些实施方式中，靶蛋白是细胞表面受体。在一些实施方式中，靶蛋白是在免疫细胞的细胞表面上表达的细胞表面受体。在一些实施方式中，靶蛋白是在T细胞的细胞表面上表达的细胞表面受体。[0257]在一些实施方式中，能够结合另一个靶蛋白的抗原结合结构域可以结合T细胞受体TCR复合物或其组分。在一些实施方式中，抗原结合结构域能够结合CD3或CD3多肽。在一些实施方式中，抗原结合结构域可以有能力结合⑶3多肽⑶3γ，⑶3δ，〇ϋ3ζ或⑶3ε中的一个或多个。在一些实施方式中，双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器抗体。[0258]在一些实施方式中，双特异性抗体或片段能够引导针对ΊΊΜ-3表达细胞的T细胞活性例如细胞毒活性）。也就是说，在一些实施方式中，在双特异性抗体或片段的存在下，针对ΤΙΜ-3表达细胞的T细胞活性例如细胞毒活性增加例如，相对于在不存在双特异性抗体或片段时针对ΤΙΜ-3表达细胞的活性）。可以通过本领域技术人员熟知的方法在体外测定针对ΤΙΜ-3表达细胞的T细胞活性，例如如本文所述通过培育T细胞和ΤΙΜ-3表达细胞并检测细胞裂解。[0259]在一些实施方式中，双特异性抗体以两个单链可变片段scFV形式的融合蛋白而提供，其包含本发明ΤΙΜ-3结合抗体或抗体片段的Vh和Vu抗体或抗体片段的Vh和I能够结合⑶3或⑶3多肽。[0260]在一些实施方式中，CD3或CD3多肽的抗原结合结构域可以包含如抗CD3抗体克隆0ΚΤ3e生物科学“eBioscience”）、克隆CD3-12AbDSerotec、克隆UCHTl南方生物技术SouthernBiotech克隆SP7赛默科技皮尔斯抗体ThermoScientificPierceAntibodies、克隆SPV-T3b赛默飞世尔科技ThermoFisherScientific、克隆S4.17D6赛默飞世尔科技ThermoFisherScientific、克隆MEM-57AbDSerotec、克隆37895美天旎生物技术MiltenyiBiotec、克隆CA-3艾博抗Abeam、克隆4D10A6Abbiotec、克隆HIT3aAbbiotec、克隆LT3源生物科学SourceBioScience、克隆B-B11MyBioSource·com、克隆17A2诺伟司生物制品NovusBiologicals、克隆BC3生物传奇BioLegend、克隆HAM25-1352MBL国际）、克隆CA-3Bosterbio、克隆RBT-CD3生命生物科学LifespanBioSciences、Ham25-1157默克密理博）、克隆CRIS-7半岛实验室国际PeninsulaLaboratoriesInternational、克隆5B2、克隆2Q1160圣诞科鲁兹生物技术SantaCruzBiotechnology、克隆M01、克隆Β1·1亚诺法公司AbnovaCorporation、克隆EP449EBioGenex、克隆6B8D1G5、克隆6B1C12F3赛诺生物SinoBiological、克隆CL1297阿特拉斯抗体AtlasAntibodies、克隆CC23C创新诊断reativeDiagnostics、克隆TR66恩佐生命科学EnzoLifeSciences、克隆MEM-92西达连Cedarlane、克隆EPR4516奥瑞技术OrigeneTechnologies、克隆3A12H2蛋白技术组ProteintechGroup、克隆33-2A3ALPCO、克隆E272保科医学BiocareMedical、克隆SP162、克隆MRQ-39西格玛奥德里奇SigmaAldrich或克隆F7.2.38达科Dako的其他CD3-或CD3多肽-结合片段、轻和重链可变结构域或⑶R。[0261]在一些实施方式中，靶蛋白可以是CD28家族成员。在一些实施方式中，靶蛋白可以是CD28家族成员，例如PD-ICD279、LAG3CD223、IC0SCD278、CTLA4CD152、BTLACD272或CD28。[0262]在一些具体实施方式中，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段包含能够结合CD3或CD3多肽的抗原结合结构域，包含在CDR，轻链和重链可变结构域或本文所述的克隆All或克隆BlO的其它TIM-3结合片段的能够结合TIM-3的抗原结合结构域。[0263]在一些实施方式中，本发明的双特异性抗体可以表现出以下性质中的至少一种：[0264]a增进或增强TIM-3表达细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，ADCC，例如表达ΊΊΜ-3的急性骨髓性白血病细胞的细胞杀伤例如T细胞介导的细胞杀伤）；[0265]b增进或增强表达ΊΊΜ-3的干细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，ADCC，例如表达ΊΊΜ-3的、CD34+急性骨髓性白血病细胞的细胞杀伤例如T细胞介导的细胞杀伤）。[0266]在一些实施方式中，PD-I的抗原结合结构域可以包含例如抗PD-I抗体克隆J116、克隆MIH4eBioscience、克隆7A11B1罗克兰免疫化学公司RocklandImmunochemicalsInc.、克隆192106研发系统RDSystems、克隆Jl10、克隆Jl05MBL国际MBLInternational、克隆12A7D7、克隆7A11B1Abbiotec、克隆#9X21MyBioSource.com、克隆4H4D1ProteintechGroup、克隆D3W4U、克隆D304S细胞信号转导技术CellSignalingTechnology、克隆RMP1-30、克隆RMP1-14默克密理博MerckMillipore、克隆EH12.2H7BioLegend、克隆10B1227美国生物UnitedStatesBiological、克隆UMAB198或克隆UMAB197傲锐基因技术OrigeneTechnologies的其它PD-I结合片段、轻和重链可变结构域或⑶R。在一些实施方式中，LAG3的抗原结合结构域包含如抗-LAG3抗体clone17B4EnzoLifeSciences,clone333210RDSystems或clone14L676美国生物UnitedStatesBiological的其它LAG3结合片段、轻和重链可变结构域或⑶R。在一些实施方式中，ICOS的抗原结合结构域包含如抗_1COS抗体克隆ISA-3eBioscience、克隆SP98NovusBiologicals、克隆IGl、克隆3G4AbnovaCorporation、克隆669222RDSystems、克隆TQ09CreativeDiagnostics或克隆C398·4ABioLegend的其他ICOS结合片段、轻和重链可变结构域或CDR。在一些实施方式中，CTLA4的抗原结合结构域包含如抗-CTLA4抗体克隆2F1、克隆1F4AbnovaCorporation、克隆9H10EMDMillipore、克隆BNU3GeneTex、克隆1E2、克隆AS32LifeSpanBioSciences、克隆A3.4H2.H12AcrisAntibodies、克隆060SinoBi〇1〇gica1、克隆BU5G3CreatiVeDiagnostics、克隆MIH8MBLInternational、克隆A3.6B10.G1或克隆L3D10BioLegend的其他CTLA4结合片段、轻和重链可变结构域或CDR。在一些实施方式中，BTLA的抗原结合结构域包含如抗-BTLA抗体克隆1B7、克隆2G8、克隆4C5AbnovaCorporation、克隆4B8antibodies-online、克隆MIH26ThermoScientificPierceAntibodies、克隆UMAB61OriGeneTechnologies、克隆330104RDSystems、克隆lB4LifeSpanBioSciences、克隆440205、克隆5E7CreativeDiagnostics的其他BTLA结合片段、轻和重链可变结构域或⑶R。在一些实施方式中，CD28的抗原结合结构域包含如抗-CD28抗体克隆CD28.6eBioscience、克隆CD28.2、克隆JJ319NovusBiologicals、克隆204.12、克隆B-23、克隆10F3ThermoScientificPierceAntibodies、克隆37407RDSystems、克隆204-12AbnovaCorporation、克隆15E8EMDMillipore、克隆204-12、克隆YTH913.12AbDSerotec、克隆B-T3AcrisAntibodies、克隆9H6E2SinoBiological、克隆C2877MyBioSource.com、克隆KOLT-2ALPCO、克隆152-2E10SantaCruzBiotechnology或克隆XPH-56CreativeDiagnostics的其他⑶28结合片段、轻和重链可变结构域或⑶R。[0267]根据本发明的双特异性抗体或双特异性抗原结合片段的抗原结合结构域可以是能够结合抗原的多肽的任何结构域。在一些实施方式中，抗原结合结构域至少包含三个轻链CDR即LC-CDRl，LC-CDR2和LC-CDR3和三个重链CDR即HC-CDRl，HC-CDR2和HC-CDR3共同限定抗体或抗原结合片段的抗原结合区。在一些实施方式中，抗原结合结构域可以包含抗体或抗原结合片段的轻链可变结构域和重链可变结构域。在一些实施方式中，抗原结合结构域可以包含抗体或抗原结合片段的轻链多肽和重链多肽。[0268]根据本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段可以以任何合适的形式提供，例如KontermannMAbs2012,42:182-197中所述的那些形式，其全部内容通过引用并入本文。例如，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可以是双特异性抗体缀合物（例如IgG2、Fab’）2或CovX-体）、双特异性IgG或IgG样分子^|^nigG、scFv4_Ig、IgG-scFv、scFv-IgG、DVD-Ig、IgG_sVD、sVD_IgG、二合一IgG、mAb2或Tandemab通用LC、不对称双特异性IgG或IgG样分子例如kihIgG、kihIgG通用LC、CrossMab、kihIgG-scFab、mAb_Fv、电荷对或SEED体）、小双特异性抗体分子例如，双特异抗体Db、18〇13、041?1'、8〇013、丨11^8、串联scFvtaFv、串联dAbVHH、三重体、三重头、Fab-scFv或Fab’）2_scFv2、双特异性Fc和Ch3融合蛋白（例如taFv-Fc，Di_双抗体、scDb_CH3、scFv-Fc-scFv、HCAb_VHH、scFv-kih-Fc或scFv-kih_CH3或双特异性融合蛋白（例如scFv2_白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-毒素、0见_Fab3、DNL-Fab4-IgG、DNL-Fab4-IgG-细胞因子2。特别参见KontermannMAbs2012,42:182-19的图2。[0269]技术人员能够设计和制备根据本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段。[0270]用于产生双特异性抗体的方法包括抗体或抗体片段的化学交联，例如采用可还原的二硫键或不可还原的硫醚键，例如Segal和Bast，2001中所述。双特异性抗体的生产ProductionofBispecificAntibodies·目前的免疫学方案（CurrentProtocolsinImmunology.14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16,其全部内容通过引用并入本文。例如，N-琥珀酰亚胺基-3--2-吡啶基二硫代）丙酸酯（SPDP可用于化学交联，如Fab片段，通过铰链区SH-基团，以产生二硫键连接的双特异性Fab2异二聚体。[0271]用于产生双特异性抗体的其它方法包括融合产生抗体的杂交瘤，例如与聚乙二醇一起制备能够分泌双特异性抗体的四价体瘤细胞，例如D.M.和Bast，B.J.2001.双特异性抗体的生产（ProductionofBispecificAntibodies.目前的免疫学方案（CurrentProtocolsinImmunology·14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16。[0272]根据本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段也可以通过从例如，编码抗原结合分子多肽的核酸构建体表达重组生产，例如，如抗体工程:方法和方案AntibodyEngineering:MethodsandProtocols，第二版（Humana出版，2012，第40章：双特异性抗体的生产：双抗体和串联scFvHornig和FSrber-Schwarz或法文，如何制备双特异性抗体，分子医学方法MethodsMol.Med.2000;40:333-339中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。[0273]例如，编码两个抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域（S卩，能够结合TIM-3的抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域，以及能够结合另一个靶蛋白的抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域），并且包括编码抗原结合结构域之间的合适连接子或二聚化结构域的序列的DNA构建体可以通过分子克隆技术制备。此后可以通过在合适的宿主细胞例如哺乳动物宿主细胞）中表达例如体外）构建体来产生重组双特异性抗体，然后任选地纯化表达的重组双特异性抗体。[0274]本发明的抗体，抗原片段或多肽也可用于构建嵌合抗原受体CAR;也称为人工T细胞受体），其中通过重组技术将受体工程化以将选定的特异体移植到免疫细胞上，例如，单特异性克隆抗体可以接入到T细胞上，并且修饰的T细胞可用于治疗疾病，例如，癌症。CAR的一种形式是融合的scFv，包含本发明的抗体、抗原结合片段或多肽其与合适的受体支架的跨膜和内部结构域的融合。产生CAR的技术描述于Pule，M等人（2003细胞疗法“Cytotherapy”53:211-26中。[0275]抗体可以通过亲和力成熟的过程产生，其中产生与未修饰的亲本抗体相比抗体对抗原的亲和力有改善的经修饰的抗体。亲和力成熟抗体可以通过本领域已知的方法生产，例如Marks等人，RioTechnology10:779-7831992;Barbas等人ProcNat.Acad.Sci.USA91:3809-38131994;Schier等人·基因“Gene”169:147-1551995;Yelton等人J.Immunol.155:1994-20041995;Jackson等人·，J.Immunol.1547:3310-1591995;和Hawkins等人，J·Mol·Biol·226:889-8961992。[0276]本发明的抗体优选表现出与TIM-3的特异性结合。特异性结合靶分子的抗体优选以更高的亲和力和或具有比其结合于其它靶标的更长的持续时间结合靶标。在一个实施方式中，抗体与无关靶标的结合程度小于例如通过ELISA或放射免疫测定RIA测量的抗体与靶标的结合的约10%。或者，结合特异性可以反映在结合亲和力方面，其中本发明的抗TIM-3抗体与ΊΊΜ-3结合的Kd比抗体对另一靶分子，如ΊΊΜ-3家族的另一成员的Kd大至少0.1个数量级（即〇.IXIOn，其中η为表示数量级的整数）。这可以任选地为至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中的一个。[0277]本发明的抗体优选具有彡ΙμΜ，99%⑶34+纯度与纯化的T细胞以1:1的比例混合，并以不同的浓度加入抗体。孵育24小时后，测定裂解。[0454]图17.串联单链双特异性抗体形式的示意图。实施例[0455]抗人TIM-3抗体的分离[0456]在三轮生物淘选过程中通过体外选择从人抗体噬菌体展示文库中分离抗ΊΊΜ-3抗体。[0457]基本上，将链霉亲和素磁珠用生物素化的人ΊΊΜ-3包被，并用于使用磁选分选出抗ΊΊΜ-3特异性噬菌体。在选择过程中添加了去除潜在的抗生物素抗体的一些步骤。[0458]在ΗΒ2151细胞小规模诱导后，通过ELISA筛选Fab抗体。简言之，用连接到人Fc的人Tim-3包被ELISA平板，并用酪蛋白溶液封闭。在I3BSTween-20中经过大量洗涤之后，将来自诱导平板的含Fab上清液在PBS中7%牛奶存在下转移到ELISA板中。在室温下在搅拌和大量洗涤90分钟后，加入与HRP偶联的山羊抗人Fab抗体。1小时后，洗涤板，加入TMB底物。用IMHCl终止反应，并在450nm处测量光密度，670nm作为参考。选择吸光度0.1的抗体作为阳性。通过DNA指纹图谱进行第一次克隆筛选;然后通过测序证实克隆性。[0459]与人ΊΊΜ-3结包含及与小鼠ΊΊΜ-3交叉反应[0460]通过如上所述的ELISA使用与人Fc偶联的人或小鼠ΊΊΜ-3作为抗原来评估与人或小鼠ΊΊΜ-3的结合。还使用人Fc作为阴性对照抗原来评估与人Fc的非特异性结合图5和9。[0461]体外阻断ΊΊΜ-3半乳凝素-9相互作用[0462]偶联到藻红蛋白的人ΊΊΜ-3在室温下用FACS缓冲液中各种浓度的抗体预温育30分钟。然后将这样的预混物加入到先前接种在96孔板中的表达半乳凝素-9的M0LT3细胞上，并在抗⑶16CD32抗体存在下在FixPerm缓冲液中固定透化。在预混物存在下于4°C温育30分钟后，在PermWash缓冲液中洗涤3次，将细胞重悬于PBS中，并通过流式细胞仪进行分析图6和10。[0463]使用藻红蛋白染色的细胞比例测定抗体阻断ΊΊΜ-3半乳凝素-9相互作用的能力：[0465]分离的抗TIM-3抗体的亲和力[0466]通过表面等离子体共振测量人TIM-3抗体的亲和力。[0467]简单地说，与人Fc结合的人ΊΊΜ-3被固定在与普罗特ProteonXPR36生物分析仪伯乐Biorad兼容的传感器芯片上。然后将抗体作为流动物施加到芯片上。记录每个候选Fab的结合解离速率和计算的亲和力Kd图7和11。[0468]体外功能活性:抗体依赖性细胞毒性ADCC[0469]根据法国-美国-英国分类系统，急性骨髓性白血病AML根据疾病起源的细胞类型及其成熟程度，分为8种不同的亚型MO至M7型。除M3细胞外，所有AML细胞株均表达ΊΊΜ-3。[0470]在AML细胞系上测试抗TIM-3抗体杀死TIM-3表达的AML细胞的能力。基本上，在RPMI，10%FBS和lOygmL抗体存在下，将AML细胞与NK细胞（1:1比例）共培养。在37°C下4小时后，收集细胞，并在流式细胞术测定中使用钙黄绿素AM染色测量细胞死亡存活比（图8和12〇[0471]然后使用表达为IgGl的All构建能够一侧接合T细胞CD3的特异性）、另一侧靶向TIM-3的双特异性抗体。双特异性抗体包含两个单链可变片段scFv作为融合蛋白。scFv中的一个包含克隆All的Vh和Vl序列（S卩SEQIDN0:45和50，另一个scFv包含抗⑶3抗体克隆的Vh和Vl序列。[0472]串联单链双特异性抗体的形式如图17所示。[0473]按照类似的方案，在AML细胞和PBMCPBMCAML比例20:1的共培养物上以10ygmL测试双特异性抗体图13。[0474]然后按照同样的方案，在纯化的T细胞和AML干细胞（1:1比例）的测定中测试抗TIM-3克隆All-抗⑶3双特异性抗体图14。[0475]工程化[0476]克隆All被进一步工程化;其序列被恢复成类似种系的框架，产生克隆All_gl仅在轻链可变结构域中修饰）。[0477]通过双特异性抗ΊΊΜ-3、抗CD3抗体特异性杀伤来自患者急性骨髓性白血病细胞[0478]测试抗TIM-3克隆All，以及抗⑶3抗TIM-3克隆All-抗⑶3双特异性抗体）的串联单链双特异性形式，以评估其杀死从AML患者活检获得的急性骨髓性白血病AML细胞的能力。[0479]简言之，将纯化的T细胞与获自3线化疗难治性患者的AML细胞以1:1的比例混合。以各种浓度加入双特异性抗体，将混合物孵育24小时。孵育后，检测AML细胞裂解。[0480]结果如图15所示。证明抗ΊΊΜ-3克隆All-抗⑶3双特异性抗体在体外有效从化疗难治性患者中杀死AML细胞。[0481]还构建并测试了串联单链Fv形式的抗ΊΊΜ-3克隆BlO-抗⑶3双特异性抗体，并在高浓度时显示杀死图15。[0482]然后在AML干细胞，即表达高水平⑶34的AML活组织检查细胞内测试克隆All-抗CD3双特异性抗体。选择后，将⑶34+细胞样品99%⑶34+纯度与纯化的T细胞以1:1的比例混合，并以不同的浓度加入抗体。孵育24小时后，测定裂解。[0483]结果如图16所示。抗ΊΊΜ-3克隆All-抗⑶3双特异性抗体显示了离体杀死AML干细胞的能力。

权利要求：1.一种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRl:RASQDIGSYLASEQIDN0:6iiLC-CDR2:AASTLQSSEQiDN0:7iiiLC-CDR3:QQSYSSPPTSEQIDN0:8ivHC-CDRI:SYYMHSEQiDNO:58,i-'icGYTFTSYYMHSEQIDNO:24vHC-CDR2:IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25viHC-CDR3:SPGVVTALFDYSEQIDNO:26或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:RASQDIGSYLASEQIDNO:6LC-CDR2:AASTLQSSEQIDNO:7LC-CDR3:QQSYSSPPTSEQIDNO:8。3.如权利要求I或2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDR]:SYYMHSEQIDNO:58.^GYTFTSYYMHSEQIDNO:24HC-CDR2:11NPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25HC-CDR3:SPGVVTALFDYSEQIDΝΟ:26,4.如权利要求1-3任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。5.如权利要求1-4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。6.—种任选分离的体外复合物，其包含与ΊΊΜ-3结合的权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段。7.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:RASQDIGSYLASEQIDNO:6LC-CDR2:AASTLQSSEQIDNO:7LC-CDR3:QQSYSSPPTSEQIDNO:8。8.—种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDRI:SYYMHSEQIDNO:58，成GYTFTSYYMHSEQ!DNO:24HC-CDR2;IINPSGGSTSYAQKFQG{SEQIDNO:25HC-CDR3:SPGVVTALFDYSEQ!DNO:26〇9.一种如权利要求7所述的分离的轻链可变区多肽与权利要求8所述的重链可变区多肽组合。10.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分另Ij与SYYMHSEQIDNO:58或GYTFTSYYMHSEQIDNO:24^IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25、SPGVVTALFDYSEQIDN0:26具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与RASQDIGSYLASEQIDN0:6、AASTLQSSEQIDN0:7、QQSYSSPPTSEQIDNO:8具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。11.一种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:19具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:1具有至少85%的序列同一性。12.—种能结合ΊΊΜ-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRl:RASQSVGSYLASEQIDN0:9iiLC-CDR2:DATNRATSEQ!DNO:10iiiLC-CDR3;QHRRTSEQIDN0:1IivHC-CDRI:SSDYYWGSEQ!DNO:59^GGSIGSSDYYWGSEQIDNO:27vHC-CDR2:SIYYSGSTYYNPSLKSSEQIDNO:28viHC-CDR3:GEHRGEFDYSEQIDN〇-29或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。13.如权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:RASQSVGSYLASEQIDNO:9LC-CDR2:DATNRATSEQIDNO:10LC-CDR3:QHRRTSEQIDNO:11。14.如权利要求12或13所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDRl:SSDYYWGSEQIDNO:59成GGSIGSSDYYWGSEQIDNO:27HC-CDR2:SIYYSGSTYYNPSLKSSEQIDNO:28HC-CDR3:GEHRGEFDYSEQ!DNO:29：,15.如权利要求12-14任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。16.如权利要求12-15任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示出T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。17.—种任选分离的体外复合物，其包含与ΊΊΜ-3结合的权利要求12至16中任一项所述的抗体或抗原结合片段。18.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:RASQSVGSYLASEQIDNO:9LC-CDR2:DATNRATSEQIDNO:10LC-CDR3:QHRRTSEQIDNO:11。19.一种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDR1:SSDYYWGSEQIDΝΟ:59ί%GGSIGSSDYYWGSEQIDNO:27HC-CDR2:SIYYSGSTYYNPSLKSSEQIDNO:28HC-CDR3:GBHRGBFDYSEQIDNO:29；120.—种如权利要求18所述分离的轻链可变区多肽与权利要求19所述的重链可变区多肽组合。21.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分别与SSDYYWGSEQIDN0:59或GGSIGSSDYYWGSEQIDN0:27、SIYYSGSTYYNPSLKSSEQIDN0:28、GEHRGEFDYSEQIDN0:29具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与RASQSVGSYLASEQIDN0:9、DATNRATSEQIDNO:10、QHRRTSEQIDNO:11具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。22.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:20具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:2具有至少85%的序列同一性。23.—种能结合ΊΊΜ-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRI:RSSQSLLHSNGYNYLDSEQIDNO:12iiLC-CDR2:LGSNRASSEQIDNO:13iiiLC-CDR3:MQGTHVVPPTSEQIDNO:14ivHC-CDRl:SSNWWSSEQIDNO:60成GGSISSSNWWSSEQIDNO:30VHC-CDR2:EIYHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:31v〇HC-CDR3:VVAVAGTVDYSEQIDN〇:32或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。24.如权利要求23所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:RSSQSLLHSNGYNYLDSEQIDNO:12LC-CDR2:LGSNRASSEQIDNO:13LC-CDR3:MQGTHffPPTSEQIDNO:14。25.如权利要求23或24所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDRl:SSNWWSSEQIDNO:60成GGSISSSNWWSSEQIDNO:30HC-CDR2:EIYHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:3iHC-CDR3:VVAVAGTVDYSEQIDNO:32；,26.如权利要求23-25任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。27.如权利要求23-26任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示出T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。28.—种任选分离的体外复合物，其包含与TIM-3结合的权利要求23-27中任一项所述的抗体或抗原结合片段。29.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:RSSQSLLHSNGYNYLDSEQIDNO:12LC-CDR2:LGSNRASSEQIDNO:13LC-CDR3:MQGTHffPPTSEQIDNO:14。30.—种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDRI:SSNWWSSEQIDNO:60成GGSISSSNWWSSEQIDNO:30HC-CDR2:EIYHSGSTNYNPSLKSSEQIDNO:31HC-CDR3:VVAVAGTVDYSEQIDNO:32,31.—种如权利要求29所述的分离的轻链可变区多肽与权利要求30所述的重链可变区多肽组合。32.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分别与SSNWWSSEQIDN0:60或GGSISSSNWWSSEQIDNO:30、EIYHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:31、VVAVAGTVDYSEQIDN0:32具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与RSSQSLLHSNGYNYLDSEQIDNO:12、LGSNRASSEQIDNO:13、MQGTHffPPTSEQIDNO:14具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。33.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:21具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:3具有至少85%的序列同一性。34.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRl:RASQSVSSSTLASEQIDNO:15iiLC-CDR2:GASSRATSEQ!DNO:16iiiLC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17ivHC-CDRI:SYYMHSEQ!DNO:58^GYTFTSYYMHSEQIDNO:24vHC-CDR2:I!NPSGGSTSYA〇KF〇GSEQIDNO:25viHC-CDR3:DQYSSGWYYYGMDYSEQIDNO:33或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。35.如权利要求34所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:RASQSVSSSYLASEQIDNO:15LC-CDR2:GASSRATSEQIDNO:16LC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17。36.如权利要求34或35所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDRl:SYYMHSEQIDNO:58ulGYTFTSYYMHSEQ!DNO:24HC-CDR2:11NPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25HC-CDR3:DQYSSGWYYYGMDVSEQ!DNO:33：,37.如权利要求34-36任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。38.如权利要求34-37任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示出T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。39.—种任选分离的体外复合物，其包含与TIM-3结合的权利要求34-38中任一项所述的抗体或抗原结合片段。40.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:RASQSVSSSYLASEQIDNO:15LC-CDR2:GASSRATSEQIDNO:16LC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17。41.一种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDRl:SYYMHSEQIDNO:58*j£GYTFTSYYMHSEQIDNO:24HC-CDR2:IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25HC-CDR3:DQYSSGWYYYGMDYSEQIDNO:33：,42.—种如权利要求40所述的分离的轻链可变区多肽与权利要求41所述的重链可变区多肽组合。43.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分另Ij与SYYMHSEQIDNO:58或GYTFTSYYMHSEQIDNO:24^IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25、DQYSSGWYYYGMDVSEQIDN0:33具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与RASQSVSSSYLASEQIDN0:15、GASSRATSEQIDN0:16、QQYGSSPITSEQID从：17具有至少85%总体序列同一性的1^001?1儿：-〇1?2儿：-〇1?3。44.一种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:22具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:4具有至少85%的序列同一性。45.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRl:RASQSVSSSYLASEQIDNO:15iiLC-CDR2;GASSRATSEQIDNO:16iiiLC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17ivHC-CDRI:SYYMHSEQIDNO:58成GYTFTSYYMHSEQIDNO:24vHC-CDR2:11NPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25viHC-CDR3:r3LYSYGFYYYGMDYSEQIDNO:34或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。46.如权利要求45所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:RASQSVSSSYLASEQIDNO:15LC-CDR2:GASSRATSEQIDNO:16LC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17。47.如权利要求45或46所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDRI;SYYMHSEQIDNO:58成GYTFTSYYMHSEQIDNO:24HC-CDR2:11NPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25HC-CDR3:DLYSYGFYYYGMDVSEQIDNO:34；48.如权利要求45-47任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。49.如权利要求45-48任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示出T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。50.—种任选分离的体外复合物，其包含与TIM-3结合的权利要求45-49中任一项所述的抗体或抗原结合片段。51.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:RASQSVSSSYLASEQIDNO:15LC-CDR2:GASSRATSEQIDNO:16LC-CDR3:QQYGSSPITSEQIDNO:17。52.—种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDR1:SYYMHSEQIDN0:58成GYTFTSYYMHSEQIDNO:24HC-CDR2:1INPSGGSTSYAQKFQGSEQIDNO:25HC-CDR3:DLYSYGFYYYGMDVSEQIDNO:34。53.—种如权利要求51所述的分离的轻链可变区多肽与权利要求52所述的重链可变区多肽组合。54.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分另Ij与SYYMHSEQIDNO:58或GYTFTSYYMHSEQIDNO:24^IINPSGGSTSYAQKFQGSEQIDN0:25、DLYSYGFYYYGMDVSEQIDN0:34具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与RASQSVSSSYLASEQIDNO:15、GASSRATSEQIDNO:16、QQYGSSPITSEQID从：17具有至少85%总体序列同一性的1^001?1儿：-〇1?2儿：-〇1?3。55.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:23具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:5具有至少85%的序列同一性。56.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，具有氨基酸序列i-vi:iLC-CDRI:SGSSSNIGNNYVSSEQIDNO:47iiLC-CDR2:GNNWRPSSEQIDNO:48iiiLC-CDR3:ETWDSSLSAGVSEQIDNO:49ivHC-CDRl:GYYWSSEQIDN0:61成GGSFSGYYWSSEQIDNO:52vHC-CDR2:EINHSGSTNYNPSLKSSEQIDNO;53viHC-CDR3:GYVAGFDYSEQIDNO:54或其变体，其中序列（i至vi的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替代。57.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个轻链可变区：LC-CDRl:SGSSSNIGNNYVSSEQIDNO:47LC-CDR2:GNNWRPSSEQIDNO:48LC-CDR3:ETWDSSLSAGVSEQIDN0:49。58.如权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，具有包含以下CDR的至少一个重链可变区：HC-CDRl:GYYWSSEQIDN0:61成GGSFSGYYWSSEQIDNO:52HC-CDR2:EINHSGSTNYNPSLKSSEQIDNO:53HC-CDR3:GYVAGFDYSEQIDNO:54,59.如权利要求1-3任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体是细胞毒性的。60.如权利要求1-4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体有效恢复显示出T细胞耗尽或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。61.—种任选分离的体外复合物，其包含与TIM-3结合的权利要求1-5中任一项所述的抗体或抗原结合片段。62.—种分离的轻链可变区多肽，包括以下⑶R:LC-CDRl:SGSSSNIGNNYVSSEQIDNO:47LC-CDR2:GNNWRPSSEQIDNO:48LC-CDR3:ETffDSSLSAGVSEQIDN0:49。63.—种分离的重链可变区多肽，包括以下⑶R:HC-CDRl:GYYWSSEQIDNO:61成GGSFSGYYWSSB〇IDNO:52HC-CDR2:EINHSGSTNYNPSLKSSEQIDNO:53HC-CDR3:GYVAGFDYSEQIDNO:54；,64.—种如权利要求7所述的分离的轻链可变区多肽与权利要求8所述的重链可变区多肽组合。65.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链包含分另Ij与GYYWSSEQIDNO:61或GGSFSGYYWSSEQIDNO:52^EINHSGSTNYNPSLKSSEQIDN0:53、GYVAGFDYSEQIDN0:54具有至少85%总体序列同一性的HC-CDRl、HC-CDR2、HC-CDR3，和轻链包含分别与SGSSSNIGNNYVSSEQIDN0:47、GNNWRPSSEQIDN0:48、ETWDSSLSAGVSEQIDNO:49具有至少85%总体序列同一性的LC-CDRl，LC-CDR2，LC-CDR3。66.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，包含重链和轻链可变区序列，其中：重链序列与重链序列：SEQIDN0:50或51具有至少85%的序列同一性;和轻链序列与轻链序列：SEQIDN0:45或46具有至少85%的序列同一性。67.—种能结合TIM-3的抗体或抗原结合片段，任选分离的，其是双特异性抗体或双特异性抗原结合片段，包含i权利要求1-66任一项的抗原结合片段或多肽;和ii能结合到非TIM-3靶蛋白的抗原结合域。68.如权利要求67所述的抗体或抗原结合片段，其中所述能结合到非TIM-3靶蛋白的抗原结合域能够结合CD3或CD3多肽。69.—种组合物，包含权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽，和至少一药学可接受的载体。70.—种分离的核酸，编码权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽。71.—种载体，包含权利要求70任一所述的核酸。72.—种宿主细胞，包含权利要求71所述的载体。73.—种制备权利要求1-68任一项所述的抗体、或抗原结合片段或多肽的方法，包括在适合编码所述抗体、或抗原结合片段或多肽的载体表达的条件下，培养权利要求71所述的宿主细胞，并回收所述抗体、或抗原结合片段或多肽。74.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗，或用于医疗方法。75.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗癌症或T细胞功能障碍性疾病。76.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗癌症。77.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽用于治疗T细胞功能障碍性疾病。78.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽的用途，用于制备用于治疗癌症或T细胞功能障碍性病症的药物。79.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽的用途，用于制备用于治疗癌症的药物。80.—种权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽的用途，用于制备用于治疗感染性疾病的药物。81.—种体外或体内杀死表达TIM-3的细胞的方法，所述方法包括将权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽施用于表达TIM-3的细胞。82.—种体外或体内增强T细胞功能的方法，所述方法包括将权利要求1-686任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽施用于功能失调的T细胞。83.—种治疗癌症或T细胞功能障碍的方法，所述方法包括向患有癌症或T细胞功能障碍的患者施用权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽。84.—种治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽。85.—种治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向患有感染性疾病的患者施用权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽。86.—种方法，包括将包含或疑似含有ΊΊΜ-3的样品与权利要求1-68任一项所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体、或抗原结合片段与TIM-3的复合物的形成。87.—种诊断对象的疾病或病症的方法，所述方法包括在体外使来自对象的样品与权利要求1-68任一项所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段和TIM-3的复合物形成。88.—种选择或分选对象用于TIM-3信号传导调节剂治疗的方法，所述方法包括在体外将来自对象的样品与权利要求1-68任一项所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段和TIM-3的复合物的形成。89.权利要求1-68任一项所述的抗体或抗原结合片段的用途，用于体外检测TIM-3。90.权利要求1-68任一项所述的抗体或抗原结合片段的用途，用作体外诊断试剂。91.一种扩增T细胞群的方法，其中T细胞在体外或离体与权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽接触。92.—种治疗患有T细胞功能障碍病症的对象的方法，所述方法包括在权利要求1-68任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽存在下培养由对象血液样品获得的T细胞以扩增T细胞群，收集扩增的T细胞，并将扩增的T细胞施用于需要治疗的对象。

百度查询： 新加坡科技研究局 抗TIM-3抗体

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