申请/专利权人：苏州恒康生命科学有限公司

申请日：2022-03-06

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN114480292B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/113;C12N15/62;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00

优先权：["20220124 CN 2022100793667"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明提供了利用shRNA沉默人Tim‑3基因构建靶向ROR1的CAR‑T细胞的方法及其应用，本发明方法制备的HKP55CAR‑T细胞能应用于癌症的治疗。本发明通过设计3种不同的小发卡RNA（shRNA）序列特异性的靶向Tim‑3基因，通过筛选获得沉默效果最好的shRNA‑3序列。因此，将shRNA‑3序列与靶向ROR1的CAR序列共转导入T细胞，制备出Tim‑3基因沉默的ROR1CAR‑T（HKP55CAR‑T）细胞。HKP55CAR‑T细胞的Tim‑3表达水平极大的降低，与ROR1CAR‑T（HKP69CAR‑T）细胞相比较，Tim‑3基因的沉默显著增强了ROR1CAR‑T细胞对高表达Galectin‑9的靶细胞的体外杀伤以及靶细胞依赖的细胞增殖。因此，HKP55CAR‑T细胞能够克服复杂的免疫抑制性的肿瘤微环境，持续增殖并发挥抗肿瘤效应功能。

主权项：1.利用shRNA沉默人Tim-3基因构建靶向ROR1的CAR-T细胞的方法，其特征在于，通过设计小发卡RNA序列特异性的靶向Tim-3基因，筛选获得具有沉默效果的小发卡RNA序列，具有沉默效果的小发卡RNA序列与靶向ROR1的CAR序列共转导入T细胞，制备出Tim-3沉默的ROR1CAR-T,其中对Tim-3基因沉默的siRNA序列如下：Tim3-siRNA-3序列如SEQIDNo.3：GCAACCATCAGAATAGGCATCTACA；所述具有沉默效果的小发卡RNA序列为Tim-3-shRNA-3序列如SEQIDNo.5：TGCAACCATCAGAATAGGCATCTACATTCAAGAGATGTAGATGCCTATTCTGATGGTTGCTTTTTT。

全文数据：

权利要求：

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