申请/专利权人：中南大学

申请日：2019-02-28

公开（公告）日：2021-02-09

公开（公告）号：CN109700825B

主分类号：A61K31/7105(20060101)

分类号：A61K31/7105(20060101);A61P35/00(20060101);A61P11/02(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.02.09#授权;2019.05.28#实质审查的生效;2019.05.03#公开

摘要：本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂。我们首次发现circARHGAP12可能成为鼻咽癌治疗的潜在靶点。由于siRNA具有良好的沉默效果，本发明采用针对环状RNA头尾相接处的拼接位点设计siRNA对circARHGAP12进行干扰，在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕愈合实验、基质胶侵袭实验，相对于对照组，siRNA敲低circARHGAP12组细胞的侵袭和迁移能力明显减弱，即沉默circARHGAP12抑制了鼻咽癌细胞的侵袭转移。表明抑制circARHGAP12能治疗鼻咽癌，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

主权项：1.抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示；所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括siRNA。

全文数据：circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂技术领域本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用。背景技术鼻咽癌Nasopharyngealcarcinoma,NPC是一种高转移的恶性肿瘤，具有不同的发病机制和组织病理学表现。遗传易感性，表观遗传，种族衍生，地理分布，环境因素和EBV病毒感染导致NPC的恶性。鼻咽癌的发生有明显的区域特征，东南亚特别是华南和北非的病例占多数。NPC的治疗策略主要是放疗辅以化疗。虽然早期NPC患者的5年总生存率高达95％，但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。这是由于NPC的发生和发展涉及复杂的基因调控和多阶段过程，其分子机制尚不清楚，加之肿瘤异质性和放疗抵抗引起的个体差异，传统放疗的治疗效果不是非常的理想。因此，研究治疗鼻咽癌的治疗靶标和诊断的分子标记物至关重要。环状RNACircularRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNAprecursormessengerRNA,pre-mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端polyA尾巴并以共价键形成环状套索结构的非编码RNA分子。CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化exoncircularization和内含子环化introncircularization两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNAexoniccircRNA,ecircRNA可以分为套索驱动环化lariat-drivencircularization和内含子配对驱动环化intron-pairing-drivencircularization两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体splicedonor攻击5’端剪接受体splicereceptor,Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNAcircularintronicRNA,ciRNA。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端polyA尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后HsuMT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。发现更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。我们检测到一个长度为794bp的circARHGAP12。通过实验发现该环状RNA在鼻咽癌中高表达且能促进鼻咽癌的侵袭转移，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。发明内容本发明发现了一个大小794bp的circARHGAP12，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。本发明的第一个目的是提供一种抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括但不限于siRNA。进一步的，所述的siRNA优选如下：正义链5'-3'UGAACAGAUAAGGGUUUAAUU反义链5'-3'UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU；但不限于上述具体的siRNA。进一步的，所述的抑制circARHGAP12表达的试剂还包括阴性对照：正义链5'-3'UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链5'-3'CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU，但不限于上述具体的阴性对照。本发明的第二个目的是提供一种治疗鼻咽癌的制剂，包括抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括但不限于siRNA。进一步的，所述的siRNA优选如下：正义链5'-3'UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链5'-3'UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU；但不限于上述具体的siRNA。进一步的，所述的抑制circARHGAP12的试剂还包括阴性对照：正义链5'-3'UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链5'-3'CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU。但不限于上述具体的阴性对照。本发明鼻咽癌治疗制剂还包括转染siRNA所需的试剂。目前，siRNA已发展成为基因功能研究的重要工具。为了探究circARHGAP12在肿瘤发生发展中的作用，本发明根据circARHGAP12的拼接位点设计了一对siRNA，利用Hiperfect试剂将siRNA和siNC对照瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circARHGAP12的表达。转染后继续培养36小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circARHGAP12的表达水平以检测siRNA的转染效率，发现设计的siRNA能显著抑制circARHGAP12的表达水平。本发明通过大量的试验证实上述结论：即抑制circARHGAP12表达的试剂能够用于制备鼻咽癌治疗制剂。这些试验包括：体外过表达circARHGAP12试验发现能促进鼻咽癌细胞侵袭和迁移，体外沉默circARHGAP12则抑制鼻咽癌细胞的侵袭和迁移。由于siRNA具有良好的沉默效果，本发明采用针对环状RNA头尾相接处的拼接位点设计siRNA对circARHGAP12进行干扰只沉默circRNA，对线性的RNA无影响，在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕愈合实验、基质胶侵袭实验，相对于NC对照组，siRNA组细胞的侵袭和迁移能力明显减弱，即沉默circARHGAP12抑制了鼻咽癌细胞的侵袭转移。即抑制circARHGAP12能治疗鼻咽癌，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。附图说明图1为qRT-RCR检测鼻咽癌组织和非肿瘤鼻咽上皮组织以及鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达水平；左图circARHGAP12的表达水平以β-actin作为参照，N为非肿瘤鼻咽上皮组织，样本数为15例；T为鼻咽癌组织，样本数为27例，n为样本数量，均采用t检验，P1h；64℃，12000rpm30min，弃上清；7加入75％乙醇预冷1ml，混匀；84℃，7600rpm5min；弃上清，重复步骤8,9；9闪离10s，尽量吸尽上清，倒置干燥10分钟；10加入20-30μlDEPC，测RNA浓度和OD值。4、circRNA逆转录PCR反应依据abm公司5×All-In-OneRTMasterMixwithAccuRTGenomicDNARemovalKit#G492的实验说明手册操作，配置如下反应体系：逆转录PCR上机反应程序如下：25℃10min，42℃15min，85℃5min。待反应结束后，-20℃保存产物备用。5、实时荧光定量PCR先将逆转录反应产物稀释5倍，然后依据abm公司EvaGreenqPCRMasterMixMasterMix-R的实验说明手册操作，配置如下反应体系：实时荧光定量PCR机上反应程序如下：Cycle×39Bio-RadIQ5实时荧光定量PCR仪进行上述反应完成后，与内参基因β-actin标化,以2-ΔΔCT值显示目标基因的相对表达量，判定基因的表达差异。采用unpairedt-test检验计算P值。结果：收集多例鼻咽癌组织和正常炎性鼻咽上皮组织，利用qRT-PCR技术检测了circARHGAP12的表达情况。结果显示，与15例正常炎性鼻咽上皮组织相比，circARHGAP12在27例鼻咽癌组织中明显高表达，两组数据的差异具有统计学意义；此外，我们还检测了circARHGAP12在正常鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞中的表达，结果显示，鼻咽癌细胞中circARHGAP12的表达明显高于正常鼻咽上皮细胞NP69结果见图1右。因此，circARHGAP12在鼻咽癌中高表达，circARHGAP12对鼻咽癌的发生发展可能具有重要的生物学功能，可以作为诊断试剂。实施例2：sanger测序证明形成的是环状RNA为了证明circARHGAP12形成的是环状RNA而非线性的，将图1中的qRT-PCR产物回收，送公司进行sanger测序擎科公司。将公司返回的序列用DNASTAR软件进行比对，chromas软件看峰图，判断测序的质量。结果显示，circARHGAP12确实是由母基因ARHGAP12的2、3号外显子头尾相接环化形成。a.circARHGAP12由ARHGAP12的2,3号外显子首尾拼接形成，E表示exon外显子，下划线序列表示首尾的接头序列；b.circRNA形成的示意图；c.测序结果的峰图，黑色箭头表示从此处头尾相接见图2。实施例3：核质分离RNA检测circARHGAP12在细胞内的定位由于siRNA发挥作用主要是在细胞质中，因此检测circARHGAP12的定位可判断能否很好地干扰circARHGAP12的表达。利用核质分离试剂盒将细胞核和细胞质的RNA分离，然后用实时荧光定量PCR检测circARHGAP12在核、质中表达所占的比重。以GAPDH为胞质的内参，U6为细胞核的内参，结果显示circARHGAP12在核、质中的分布各占50％见图3。核、质RNA提取：1、收107个细胞，胰酶消化，10％FBS终止消化，PBS洗一遍，离心，置于冰上；2、加入100-500ul的CellFractionationBuffer，轻轻吹打，防止核破裂；3、冰上孵育5-10min；4、4℃离心，1-5min上层为细胞质部分，下层为细胞核部分；5、将上层吸出至一新的EP管，置于冰上下一步为步骤8，细胞质部分；6、在原EP管中加入与步骤2等体积的CellFractionationBuffer，温和的重悬，4℃离心，500g分钟可再重复一次；7、加入与步骤2中等体积的预冷的CellDisruptionBuffer，剧烈震荡，吹打混匀至于冰上；8、加入等体积的2XLysisBindingBuffer室温，立即吹打混匀，若混合物过于黏稠。可匀浆；9、加入与步骤8中等体积的100％乙醇，立即吹打混匀；10、将混合物移至过滤器-收集管中，一次最大体积700ul，12000rpm离心30s，弃废液；11、700ulWashSolutionI洗一次，12000rpm离心30s，弃废液；12、500ulWashSolution23洗一次，12000rpm离心30s，弃废液；13、重复步骤12；14、空离30s；15、将过滤柱移至一个新的EP管，加入40ul预热的ElutionSolution，12000rpm离心30s，再加入20ulElutionSolution12000rpm离心30s，测浓度备用。实施例4：在鼻咽癌细胞系中沉默circARHGAP12表达的效果检测根据拼接位点设计了circARHGAP12的siRNA序列，siRNA即一类长度为21-25个核苷酸的双链RNA，能与同源RNA互补结合，特异性降解目的RNA，从而抑制其表达。目前，siRNA已发展成为基因功能研究的重要工具。为了探究circARHGAP12在肿瘤发生发展中的作用，我们根据circARHGAP12的拼接位点设计了siRNA，利用Hiperfect试剂将siRNA和siNC空白对照瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circARHGAP12的表达。转染后继续培养36小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circARHGAP12的表达水平以检测siRNA的转染效率，确认circARHGAP12敲低效果达到0.5以下见图4a。然而以circARHGAP12的序列设计线性引物时，实时荧光定量PCR检测发现siRNA并未敲低线性RNA的表达，说明siRNA是特异性沉默circARHGAP12的见图4b。实施例5：在鼻咽癌细胞系中circARHGAP12过表达效果检测首先我们选择酶切位点，将circARHGAP12全长序列放入NEBcutter2.0在线网站分析，显示ClaI和SacII酶切位点为circARHGAP12全长序列中不存在的位点，同时在pcDNA3.1质粒载体购于生工生物工程公司中单一存在的DNA限制性内切酶。将circARHGAP12全长序列克隆进pcDNA3.1质粒空载，图5为绘制的过表达载体图谱。为了检测circARHGAP12的成环效率，首先我们将构建的pcDNA3.1circARHGAP12真核过表达载体在鼻咽癌细胞中进行过表达。把生长状况良好的第三、四代鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2种到12孔板中，待细胞融合度达到60％-80％时，用脂质体法lipofectamine3000把无内毒素质粒pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1circARHGAP12过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2，继续培养至36小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circARHGAP12的表达水平及成环效率。qPCR结果显示，与pcDNA3.1空质粒组细胞相比，转pcDNA3.1circARHGAP12过表达质粒组的细胞中circARHGAP12的表达水平显著升高，结果具有统计学意义见图6。实施例6：细胞划痕愈合迁移实验：1照细胞台：1000μl10μlTip头、高温高压灭菌的D-Hank’s，直尺、1000μl10μl移液枪、marker笔等，用酒精消毒后再放置在超净台内紫外照射30分钟；2待细胞长至50％～70％左右分别转染siRNA和NC组或者转染质粒；3待细胞长满平铺板底后第二天开始划痕：将10μl枪头比着直尺垂直于6孔板底部干脆快速进行十字或井字划痕，不要倾斜，力度大小一致，以确保划痕宽度尽可能一致；4吸弃培养液，用D-hanks轻轻洗涤3次，尽可能洗掉由于划痕引起的碎片细胞；5加入1％双抗2％胎牛血清的1640培养基；6拍照记录此时的十字旁边划痕宽度，记为0h；7将6孔板放回培养箱培养，间隔12h拍摄同一位置，记为12h；8间隔24h时再拍相同位置，直到划痕愈合，整理所有的图片，并进行统计分析。体外沉默circARHGAP12抑制鼻咽癌细胞的迁移利用Hiperfect试剂将siRNA和NC瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circARHGAP12的表达。在沉默了circARHGAP12的鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕实验，验证其对细胞迁移的影响。划痕愈合实验在这些细胞中的多个时间点均证实：相对于NC组，siRNA组细胞的迁移能力明显减弱。划痕宽度差异明显,且具有统计学意义。以上结果显示,沉默鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达,能够抑制鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的迁移能力结果见图7。体外过表达circARHGAP12促进鼻咽癌细胞的迁移利用脂质体法lipofectamine3000把无内毒素质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1has_circARHGAP12过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2。在确定了circARHGAP12过表达质粒的过表达良好效果后，我们在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2进行了细胞划痕愈合实验。划痕愈合实验在这些细胞中的多个时间点均证实：相对于空载pcDNA3.1+质粒组，pcDNA3.1circARHGAP12过表达质粒组细胞的迁移能力明显增强。划痕宽度差异较大,且具有统计学意义。以上结果显示,过表达鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达,能够促进鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的迁移能力。通过正反两个方向验证证明，circARHGAP12可以促进鼻咽癌细胞的迁移结果见图8。实施例7：细胞transwell侵袭实验：1基质胶准备：提前一天把冻存于-20℃的BDMatrigel胶置于4℃冰箱融化成液态，把稀释胶用的tip头、EP管置于-20℃过夜，这样第二天操作时Matrigel胶在铺胶时不会过快凝固；2基质胶稀释：BDMatrigel胶：无血清培基＝1:8，即20μl基质胶加160μl1640培基轻吹混匀；3将稀释好的基质胶加入transwell小室100μl，再沿边吸出80μl，依次铺好放入37℃培养箱里孵育2-3小时，当看到铺胶层为白色时，表明液体Matrigel胶已呈固态；4消化转染24小时后的细胞，用无血清培基洗2遍，然后使用无血清的培基重悬细胞，进行细胞计数，调整细胞浓度为每200μl中2万个细胞；5向下层小室添加800μl含有20％FBS的1640培养基，放入小室时将24孔板倾斜45°角，以避免放入小室过程中在小室和液面之间产生气泡；6每室加200μl计好数的细胞悬液到transwell上室内，将24孔板放回37℃培养箱中，根据细胞状态和细胞侵袭速度，孵育约24～48小时。7取出24孔板，用PBS或者D-hanks洗两遍，4％多聚甲醛浸洗10分钟，用清水洗3遍。8染色：用0.1％的结晶紫滴加到transwell小室的底部，室温静置5-10min，用PBS清洗2-3遍，用棉签小心擦掉小室上面的基质胶；9在24孔板中加入蒸馏水800μl，transwell上室中加入蒸馏水约200μl，然后在倒置显微镜下，任选5个不同的视野拍照，用imageJ软件进行计数和统计学分析差异的显著性。体外沉默circARHGAP12的表达影响鼻咽癌的侵袭为了探究沉默circARHGAP12后是否能够影响鼻咽癌的侵袭,我们又在三株细胞系中进行了Transwell小室基质胶侵袭实验，利用Hiperfect试剂将circARHGAP12siRNA和NC瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circARHGAP12的表达。在沉默了circARHGAP12的鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行Transwell小室基质胶侵袭实验，结果显示，siRNA组可在Transwell小室下表面观察到的肿瘤细胞数目明显少于NC组，且三株细胞系结果的趋势一致。随机拍摄5张照片并记录细胞数目，每一细胞系中两组别数据间均有明显差异，且具有统计学意义。以上结果表明，沉默鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达,能够抑制鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的侵袭能力结果见图9。体外过表达circARHGAP12促进鼻咽癌细胞的侵袭我们在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2进行了Transwell小室基质胶侵袭实验，以观察过表达circARHGAP12对细胞侵袭能力的影响。我们同样利用脂质体法lipofectamine3000把无内毒素质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1circARHGAP12过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2，继续培养到48小时后。收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circARHGAP12的表达水平及成环效率。在确定了circARHGAP12过表达质粒的过表达良好效果后，我们将细胞接种到铺基质胶的Transwell小室中，发现过表达质粒组的细胞侵袭到小室下表面的数目明显比空载组多，且两株细胞系结果的趋势一致。随机拍摄3张照片并记录细胞数目，每一细胞系中两组别数据间均有明显差异，且具有统计学意义。以上结果表明，过表达鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达,能够促进鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的侵袭能力。通过正反两个方向证明，环状RNAcircARHGAP12能够促进鼻咽癌细胞的侵袭结果见图10。序列表中南大学circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂11SIPOSequenceListing1.01794RNA智人Homosapiens1aaaguuuaacaaugacucacauucuccuaaaguuuccagccagaauaggacacgcucauu60uggucauuuucccgguccagaguucuuggauguagagaaaacuagcuucucccaggaaca120aucuugugauuccgcaggagaaggcucugaaagaauacaucaagauucugaaucugguga180ugaacuuagcagcagcuccacugaacagauaaggguuuaaaugugauacugguguagauc240uccuuguucuaagcuauauucauccaacaagccauaaagccauaaugugguauaacaucc300uuuuugagaggugaauauuauugaaugaaaauggcugacagaagugggaagauuauucca360ggacaaguguauauugagguggaauaugauuaugaauaugaagcaaaggacagaaagauu420gugauaaaacaaggggagagguacaucuuggugaaaaagaccaaugaugacugguggcaa480gucaagccagaugaaaacuccaaagcguuuuaugugccagcccaguaugugaaggagguc540acgcgcaaagcucucaugccaccuguuaagcagguagcuggucugccaaauaacuccacg600aaaauaaugcagaguuugcaucuucagagaucaacagaaaaugugaacaaauugccugag660cuuucaaguuucggaaagccaucgucaucuguucaaggaacaggucuuauucgugaugcc720aaucagaauuuuggacccaguuauaaucaaggucagacugucaaccuaagccuggaccug780acccauaauaacgg794220DNA未知Unknown2tcaccaactgggacgacatg20321DNA未知Unknown3gtcaccggagtccatcacgat21420DNA未知Unknown4atcttgtgattccgcaggag20520DNA未知Unknown5atggctttatggcttgttgg20636DNA未知Unknown6cggatcgatgtttaaatgtgatactggtgtagatct36729DNA未知Unknown7ataccgcggccttatctgttcagtggagc29821RNA未知Unknown8ugaacagauaaggguuuaauu21921RNA未知Unknown9uuaaacccuuaucuguucauu211021RNA未知Unknown10ugaacagauaugagcaucguu211121RNA未知Unknown11cgaugcucauaucuguucauu21

权利要求：1.抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括siRNA。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的siRNA如下：正义链5'-3'UGAACAGAUAAGGGUUUAAUU反义链5'-3'UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抑制circARHGAP12表达的试剂还包括阴性对照：正义链5'-3'UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链5'-3'CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU。5.一种治疗鼻咽癌的制剂，其特征在于，包括抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。6.根据权利要求5所述的治疗鼻咽癌的制剂，其特征在于，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括siRNA。7.根据权利要求5所述的治疗鼻咽癌的制剂，其特征在于，所述的siRNA如下：正义链5'-3'UGAACAGAUAAGGGUUUAAUU反义链5'-3'UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU。8.根据权利要求5所述的治疗鼻咽癌的制剂，其特征在于，所述的抑制circARHGAP12表达的试剂还包括阴性对照：正义链5'-3'UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链5'-3'CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU。

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